Ақпарат

7.12Б: Іріктеу – Биология

7.12Б: Іріктеу – Биология


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Таңдалатын маркер әдетте жасушаларды өлтіретін антибиотикке төзімділік беретін ген болып табылады.

ҮЙРЕНУ МАҚСАТТАРЫ

Гендік инженериядағы селекцияның мақсатын анықтаңыз

Негізгі нүктелер

  • Рекомбинантты ДНҚ репликация тізбегі алынған ағзаға енгізіледі, содан кейін бөтен ДНҚ трансгендік ағзадағы қабылдаушы жасушаның ДНҚ-сымен бірге репликацияланады.
  • Жасанды генетикалық іріктеу – бұл ДНҚ-ны қабылдамаған жасушалар іріктеп өлтірілетін процесс, тек вектормен кодталған таңдалатын маркер гені бар ДНҚ-ны белсенді түрде репликациялай алатын жасушалар ғана өмір сүре алады.
  • Бактериялық жасушаларды қабылдаушы организм ретінде пайдаланған кезде, таңдалатын маркер әдетте жасушаларды, әдетте ампициллинді өлтіретін антибиотикке төзімділікті беретін ген болып табылады.

Негізгі шарттар

  • молекулалық клондау: молекулалық биологиядағы рекомбинантты ДНҚ молекулаларын құрастыру және олардың иесі ағзалар ішінде репликациясын бағыттау үшін қолданылатын тәжірибелік әдістердің жиынтығы.
  • ПТР: полимеразды тізбекті реакция

Эксперименттік генетикамен айналысатын ғалымдар қолданушы анықтаған фенотиптері бар организмдердің өмір сүруіне мүмкіндік беретін жасанды іріктеу эксперименттерін қолданады. Жасанды сұрыптау микробтық генетика саласында, әсіресе молекулалық клондау саласында кеңінен қолданылады.

ДНҚ рекомбинациясы генді ауыстыру, жою, енгізу, инверсия жасау үшін қолданылды. Гендерді клондау және генді/ақуызды белгілеу де жиі кездеседі. Гендерді ауыстыру немесе жою үшін әдетте дәріге төзімділік генін кодтайтын кассета ПТР арқылы жасалады.

Молекулалық клондау – молекулалық биологиядағы рекомбинантты ДНҚ молекулаларын құрастыру және олардың иесі ағзалар ішінде репликациясын бағыттау үшін қолданылатын тәжірибелік әдістердің жиынтығы. Клондау сөзін қолдану әдіс ДНҚ-ның бірдей молекулалары бар жасушалардың үлкен популяциясын генерациялау үшін бір тірі жасушадан бастап бір ДНҚ молекуласының репликациялануын білдіреді. Молекулалық клондау әдетте екі түрлі ағзаның ДНҚ тізбегін пайдаланады: клондалатын ДНҚ көзі болып табылатын түр және рекомбинантты ДНҚ репликациясының тірі иесі ретінде қызмет ететін түр. Молекулярлық клондау әдістері заманауи биология мен медицинаның көптеген заманауи салаларында орталық болып табылады.

Кәдімгі молекулярлық клондау тәжірибесінде клондалатын ДНҚ қызықты организмнен алынады. Содан кейін кішірек ДНҚ фрагменттерін жасау үшін пробиркадағы ферменттермен өңделеді. Кейіннен бұл фрагменттер рекомбинантты ДНҚ молекулаларын жасау үшін векторлық ДНҚ-мен біріктіріледі. Содан кейін рекомбинантты ДНҚ қабылдаушы ағзаға енгізіледі (әдетте өсіруге оңай, қатерсіз, зертханалық штамм). E. coli бактериялар). Бұл рекомбинантты ДНҚ молекулалары иесі ДНҚ-мен бірге репликацияланатын организмдердің популяциясын жасайды. Олардың құрамында бөгде ДНҚ фрагменттері болғандықтан, бұл трансгендік немесе генетикалық түрлендірілген микроорганизмдер (ГМО). Бұл процесс бір бактериялық жасушаны бір рекомбинантты ДНҚ молекуласын қабылдауға және репликациялауға болатынын пайдаланады. Содан кейін бұл жалғыз жасушаны экспоненциалды түрде кеңейтуге болады, олардың әрқайсысында бастапқы рекомбинантты молекуланың көшірмелері бар бактериялардың үлкен мөлшерін жасауға болады. Осылайша, нәтижесінде пайда болған бактерия популяциясы да, рекомбинантты ДНҚ молекуласы да әдетте «клондар» деп аталады. Қатаң айтқанда, рекомбинантты ДНҚ ДНҚ молекулаларына жатады, ал молекулалық клондау оларды құрастыру үшін қолданылатын тәжірибелік әдістерге жатады.

Молекулярлық клондау ДНҚ-ның химиялық құрылымының барлық тірі организмдерде түбегейлі бірдей болатынын пайдаланады. Демек, егер ДНҚ репликациясына қажетті молекулалық реттіліктері бар ДНҚ сегментіне кез келген ағзаның ДНҚ-ның кез келген сегменті енгізілсе және нәтижесінде алынған рекомбинантты ДНҚ репликация тізбегі алынған ағзаға енгізілсе, онда бөгде ДНҚ репликацияланады. трансгендік организмдегі иесі жасушаның ДНҚ-сымен бірге.

Молекулярлық клондау полимеразды тізбекті реакцияға (ПТР) ұқсас, өйткені ол белгілі бір ДНҚ тізбегін репликациялауға мүмкіндік береді. Екі әдістің түбегейлі айырмашылығы молекулалық клондау тірі микроорганизмдегі ДНҚ репликациясын қамтиды, ал ПТР тірі жасушаларсыз in vitro ерітіндісінде ДНҚ репликациялайды. Қай әдіс қолданылса да, таңдалған хост-организмге рекомбинантты ДНҚ енгізу әдетте төмен тиімділік процессі болып табылады; яғни жасушалардың аз ғана бөлігі ғана ДНҚ-ны қабылдайды. Эксперименттік ғалымдар бұл мәселені жасанды генетикалық іріктеу сатысы арқылы шешеді, онда ДНҚ-ны қабылдамаған жасушалар іріктеліп жойылады және вектормен кодталған таңдалатын маркер гені бар ДНҚ-ны белсенді түрде репликациялай алатын жасушалар ғана өмір сүре алады. Бактериялық жасушаларды қабылдаушы организм ретінде пайдаланған кезде, таңдалатын маркер әдетте жасушаларды, әдетте ампициллинді өлтіретін антибиотикке төзімділікті беретін ген болып табылады. Векторы бар жасушалар антибиотикпен әсер еткенде аман қалады, ал векторлық тізбекті қабылдай алмағандар өледі. Сүтқоректілердің жасушалары (мысалы, адам немесе тінтуір жасушалары) пайдаланылған кезде маркер генінің (бұл жағдайда әдетте kanMX кассетасының бөлігі ретінде кодталған) Генетицин антибиотикіне төзімділік беретінін қоспағанда, ұқсас стратегия қолданылады.