Ақпарат

Буферлер*# - Биология

Буферлер*# - Биология


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Буферлер

рН өзгеруі көптеген биомолекулалардың қызметіне күрт әсер етуі мүмкін болғандықтан, бір жасушалы және көп жасушалы организмдер рН өзгеруінен өзін қорғаудың әртүрлі құралдарын әзірледі. Осы механизмдердің бірі химиялық қасиеттеріне қарай жіктеуге болатын шағын молекулаларды пайдалану болып табылады буферлер. Буферлер әдетте ерітіндідегі протондарды қайтымды байланыстыратын және ажырата алатын шағын молекулалар. Егер ортадағы рН буфер молекуласындағы протондалатын функционалдық топтың pKa мәнінен төмен болса, бұл топ протондануға бейім болады, сондықтан ерітіндіден протонды «алып тастайды». Балама түрде, егер ортадағы рН буферлік молекуладағы бірдей протондалатын функционалдық топтың pKa мәнінен жоғары болса, бұл топ жергілікті рН төмендете отырып, протонациялануға бейім болады немесе қалады.

өмір сүру үшін қажетті тар ауқымда мұқият ұсталған дене. Қанның рН деңгейін тұрақты ұстау адамның әл-ауқаты үшін өте маңызды. Адам қанының рН деңгейін ұстап тұратын буферге көмір қышқылы (H2CO3), бикарбонат ионы (HCO3-) және көмірқышқыл газы (CO2) кіреді. Бикарбонат иондары бос сутегі иондарымен қосылып, көмір қышқылына айналғанда, сутегі иондары жойылып, рН өзгереді. Сол сияқты артық көмірқышқылды көмірқышқыл газына айналдырып, өкпе арқылы дем шығаруға болады. Бұл қанда тым көп бос сутегі иондарының жиналуын болдырмайды және оның рН деңгейін қауіпті түрде төмендетеді. Сол сияқты, жүйеге тым көп OH– енгізілсе, көмір қышқылы онымен әрекеттесіп, бикарбонат түзеді, рН төмендетеді. Бұл буферлік жүйе болмаса, дененің рН деңгейі өмір сүруге қауіп төндіретіндей өзгереді.

1-сурет. Бұл диаграмма дененің қан рН деңгейін буферлеуін көрсетеді. Көгілдір көрсеткілер рН жоғарылату процесін көрсетеді, өйткені көбірек CO2 жасалады.

Буферлердің басқа мысалдары асқазанның артық қышқылымен күресу үшін қолданылатын антацидтер болып табылады. Бұл рецептсіз сатылатын дәрілердің көпшілігі қан буферлері сияқты жұмыс істейді, әдетте сутегін сіңіруге және рН деңгейін қалыпқа келтіруге қабілетті кем дегенде бір ионмен тамақ ішкеннен кейін «жүрегі қышуынан» зардап шегетіндерге жеңілдік әкеледі. Судың көптеген пайдалы қасиеттерінен басқа, оның рН теңестіру қабілетіне ықпал ететін бірегей қасиеттері жердегі тіршілікті қолдау үшін өте маңызды.


TAE буфері

TAE буфері Трис негізі, сірке қышқылы және ЭДТА қоспасы бар буферлік ерітінді.

Молекулалық биологияда ол әдетте ДНҚ және РНҚ сияқты нуклеин қышқылдарын бөлу үшін агарозды электрофорезде қолданылады. [1] Ол әдетте рН 8,3 болатын трис-ацетатты буферден және екі валентті катиондарды секвестрлейтін ЭДТАдан тұрады. TAE TBE-ге қарағанда буферлік сыйымдылығы төмен және оңай таусылуы мүмкін, бірақ сызықты, қос тізбекті ДНҚ TAE-де жылдамырақ жұмыс істейді.

Бұрын Brody & Kern гельдік жүйелердегі тиімдірек және арзан өткізгіш орта үшін TBE және TAE буферлерін ауыстыру арқылы электрофоретикалық буферлерді жеңілдеткен. [2]

TAE (Tris-acetate-EDTA) буфері жұмыс істейтін буфер ретінде де, агарозды гельдерде де қолданылады. [3] Оның кең ауқымды мутация талдауы үшін денатурациялау градиентті гельдік электрофорез әдістерінде қолданылуы да сипатталған. [4] TAE натрий хлориді бар және онсыз ерітіндідегі ДНҚ қозғалғыштығын зерттеу үшін әртүрлі концентрацияларда қолданылған. [5] Дегенмен, ДНҚ үлгісіндегі натрий хлоридінің (және көптеген басқа тұздардың) жоғары концентрациясы оның қозғалғыштығын тежейді. Бұл алынған ДНҚ жолақ үлгісін дұрыс емес түсіндіруге әкелуі мүмкін.

TAE буфері әдетте зертханалық қолдану үшін 50 × қор ерітіндісі ретінде дайындалады. 242 г Трис негізін суда ерітіп, 57,1 мл мұзды сірке қышқылын және 100 мл 500 мМ ЭДТА (рН 8,0) ерітіндісін қосып, соңғы көлемді 1 литрге дейін жеткізу арқылы 50× ерітінді дайындауға болады. Бұл ерітіндіні 1× жұмыс ерітіндісін жасау үшін сумен 49:1 қатынасында сұйылтуға болады. Бұл 1 × ерітіндіде 40 мМ Tris, 20 мМ сірке қышқылы және 1 мМ ЭДТА болады.

Жоқ. Аты 1 мольге Негізгі шешім 50× 1 × ерітінді 1X
1 Трис негізі 121,1 г/л 2 М 242,2 г/л 40 мм 4,844 г/л
2 сірке қышқылы 57,1 мл/л 1 М 57,1 мл/л 20 мм 1,21 мл/л
3 ЭДТА динатрий тұзы дигидраты 372,24 г/л 50 мм 18,612 г/л 1 мм 0,372 г/л

2 М = 2000 мМ, сондықтан 1× үшін 2000 мМ /50 = 40 мМ.
1М = 1000 мМ сондықтан 1× үшін 1000 мМ /50 = 20 мМ.
1× үшін 50 мм /50 = 1 мМ.

Ең алдымен, бұл ингредиенттерді 500 мл ерітіп, содан кейін 1000 мл-ге дейін жеткізу керек.
Ескертпе: EDTA ерітуге көп уақыт кетеді, сондықтан EDTA еріту кезінде магнитті араластырғышты пайдаланыңыз (3 немесе 4 рет EDTA аз мөлшерде).


Буфер

жылы химия , буфер – бұл жүйе, әдетте сулы (су ) шешім , бұл оның болуына қарсы тұрады рН оған қышқыл немесе негіз қосылғанда өзгереді.

Әдетте ерітіндіге қышқылды қосқанда оның рН төмендейді, ал негізді қосқанда рН жоғарылайды. Егер ерітінді буфер болса, оның рН мөлшері қосылған қышқыл немесе негіз мөлшерінен күтілетіннен әлдеқайда аз дәрежеде өзгереді. «Буферленген аспирин» деп аталатын бұл шынымен буфер емес, өйткені ол қарсылық көрсетпейді қышқылдар мен негіздер . Бұл жай ғана аспирин сияқты негізгі қосылыспен біріктірілген магний карбонатты немесе алюминий гидроксиді , ол кейбір асқазан қышқылын бейтараптандырады.

Барлығы дерлік химиялық реакциялар сулы ерітіндіде өтетін, яғни барлық дерлік химиялық реакциялар – концентрацияларына сезімтал сутегі иондары мен гидроксид иондары, яғни ерітіндінің рН мәніне дейін. Себебі сутегі мен гидроксид иондары судың иондары болып табылады. Атап айтқанда, өмірге қажетті көптеген биохимиялық процестер әртүрлі дене сұйықтықтарының қышқылдығына өте сезімтал. Әртүрлі табиғи буферлік жүйелер дененің рН мәндерін денсаулыққа қажетті шектерде сақтайды. Мысалы, бірнеше буфер жүйесі адамның рН деңгейін ұстайды қан сау адамда 7,33 пен 7,43 аралығында. Қанның рН 7,0 төмен немесе 7,8 жоғары болуы өлімге әкелуі мүмкін.


PBS көптеген қолдануларға ие, өйткені ол изотоникалық және көптеген жасушалар үшін улы емес. Бұл қолданулар затты сұйылтуды және жасуша контейнерін шаюды қамтиды. EDTA бар PBS сонымен қатар бекітілген және жинақталған жасушаларды ажырату үшін қолданылады. Алайда мырыш сияқты екі валентті металдарды қосуға болмайды, өйткені бұл жауын-шашынға әкеледі. Қолданбалардың осы түрлері үшін Good's буферлері ұсынылады. PBS SARS-CoV-2 сияқты РНҚ вирустарын тасымалдауға және сақтауға қатысты вирусты тасымалдау ортасына қолайлы балама екені көрсетілді [1]

PBS ерітінділерін дайындаудың көптеген әртүрлі әдістері бар (олардың бірі стандартты PBS-тен басқа құрамға ие Dulbecco фосфатты-буферлі тұзды ерітіндісі (DPBS) болып табылады [2] ). Кейбір құрамдарда калий мен магний жоқ, ал басқаларында кальций және/немесе магний бар (буфердің тірі немесе бекітілген тіндерге қолданылуына немесе пайдаланылмауына байланысты: соңғысы KCl немесе MgCl қажет емес.2 ).

PBS ең көп тараған құрамы (1×)
Тұз Концентрация (ммоль/л) Концентрация (г/л)
NaCl 137 8.0
KCl 2.7 0.2
На2HPO4 10 1.42
К.Х2PO4 1.8 0.24

Барлық тұздарды еріту үшін 800 мл тазартылған судан бастаңыз. Жалпы көлемі 1 литрге дейін тазартылған суды қосыңыз. Алынған 1× PBS соңғы концентрациясы 157 мМ Na + , 140 мМ Cl - , 4,45 мМ K + , 10,1 мМ HPO болады.4 2− , 1,76 мМ H2PO4 − және рН 7,96. Буферді 7,3 мМ HPO мәніне ауыстыру үшін 2,84 мм HCl қосыңыз.4 2− және 4,6 мМ H2PO4 − соңғы рН 7,4 және Cl − концентрациясы 142 мМ үшін.

Cold Spring Harbor Protocol [3]
реагент МВт массасы (г) 10× [M] 10× массасы (г) 5× [M] 5× массасы (г) 1× [M] 1×
На2HPO4 141.95897 14.1960 0.1000 7.0980 0.0500 1.41960 0.0100
К.Х2PO4 136.08569 2.4496 0.0180 1.2248 0.0090 0.24496 0.0018
NaCl 58.44300 80.0669 1.3700 40.0335 0.6850 8.00669 0.1370
KCl 74.55150 2.0129 0.0270 1.0064 0.0135 0.20129 0.0027
рН = 7,4

7.4. Буферлік ерітінділерді жасау кезінде рН-ды рН-метрді пайдаланып тікелей өлшеу жақсы тәжірибе. Қажет болса, рН тұз қышқылы немесе натрий гидроксиді арқылы реттелуі мүмкін.

PBS коммерциялық жасалған PBS буферлік таблеткаларын немесе дорбаларын пайдалану арқылы да дайындалуы мүмкін. [4]

Егер жасуша өсіруде қолданылса, ерітіндіні аликвоттарға бөліп, автоклавтау немесе сүзу арқылы зарарсыздандыруға болады. Қолданылуына байланысты зарарсыздандыру қажет болмауы мүмкін. PBS бөлме температурасында немесе тоңазытқышта сақталуы мүмкін. Дегенмен, концентрлі ерітінділер салқындатылған кезде тұнбаға түсуі мүмкін және оларды қолданар алдында тұнба толығымен ерігенше бөлме температурасында ұстау керек.


Қолдануға дайын буферлер мен реагенттер

Біздің каталогтан басқа, Boston BioProducts тәжірибелі ғалымдар тобы мен өнімді әзірлеу мамандары арқылы тапсырыс бойынша қызметтерді ұсынады.

Сұраныс үлгісі

Келесі зерттеу жобаңызды бастамас бұрын біздің каталогтан тегін өнімді қолданып көріңіз.

Клиенттерге мінсіз қызмет көрсету үшін сізге алғыс айтқым келді. Біз әртүрлі буферлердің үлкен көлеміне тапсырыс береміз және бұл буферлер уақытында келген сайын. Буферлердің сапасы да соншалықты маңызды, және бұл жағынан біздің де көңіліміз қалмады. Барлық буферлер біздің сипаттамаларымызға сәйкес келеді. Үлкен рахмет!

Евгений Небелицкий
Novartis биомедициналық зерттеулер институттары

Тиімді бағамен жоғары сапалы өнімдер.

Пей Тонг
Бригам және әйелдер ауруханасы

Сенімді буферлер, өте жылдам айналым және өте жақсы тұтынушыларға қызмет көрсету.

Boston BioProducts командасы тамаша өнімдерді тамаша бағамен, сондай-ақ ерекше тұтынушыларға қызмет көрсетеді. Зертхананы іске қосу үшін уақыт пен бюджет өте маңызды. Boston BioProducts бізге екеуін де сақтауға көмектесті.

Джино Романо
Кремний терапиясы

Мен сіздің тұтынушыларға тиімді, сыпайы қызмет көрсетуіңізді, менің бұрынғы аккаунттарымда көрсеткен егжей-тегжейлі және жауапкершілік деңгейін, мейірімді және кәсіби қызметкерлеріңізді және тұтастай алғанда бизнесті жүргізу әдісіңізді шын жүректен бағалаймын. Мен сіздің қызметіңізді басқа компаниялар мен контактілерге ұсынамын және ұсынамын. Когендегі біздің команда сіздің жұмысыңызға қанағаттанбайтынына сенімдімін және біз бұл қарым-қатынасты жалғастыруды асыға күтеміз.


Western Blot буферлері

western blot өңдеу мен анықтаудың әрбір қадамы үшін арнайы құрастырылған буферлер туралы біліңіз. Біз батыс блоктардан мүмкін болатын ең жақсы деректерді жасауға көмектесу үшін бұғаттау буферлерінің, жуу буферлерінің, жуғыш заттардың және вестерн дақтарын тазартатын буферлердің кең ауқымын ұсынамыз.

Мақсатты ақуыздарды анықтауды оңтайландыру үшін біздің әртүрлі western blot блоктау буферін зерттеңіз

Сарысу және биотинсіз жалғыз тазартылған ақуыз

  • Антиденелер мен антиденелер комбинацияларының кең ауқымымен жақсы жұмыс істейді.
  • Стрептавидин жүйелерімен үйлесімді
  • 15 минуттан аз уақыт ішінде блоктайды
  • Орташа мол ақуыздар немесе күшті антиденелер жақындығы үшін ең жақсы
  • Ағымдағы блоктау буфері бар жоғары фон
  • Вестерн дақтарын жою және сынау
  • Фондық флуоресценцияны азайтуға көмектесу үшін артық арнайы емес байланыстыру орындарын блоктайды,
  • Нитроцеллюлозамен және төмен флуоресценциялы PVDF екеуімен жұмыс істейді
  • Жуғыш затсыз
  • 15-30 минут ішінде блоктайды
  • Флуоресценциялық вестерн блотинг
  • Құрғақ флуоресцентті дақтарды бейнелеу және сақтау

Ағартылған және тұрақтандырылған сүт ақуыздары

  • Western blotting қолданбаларында үйде жасалған сүтті блоктайтын буферлерді жоғары өнімді ауыстыру
  • Бөлме температурасында ұзақ сақтау мерзімі
  • Майсыз сүтпен жоғары фон көрінгенде пайдаланыңыз
  • Флуоресцентті және хемилюминесцентті қолдану

Сарысу және биотинсіз жалғыз тазартылған гликопротеин

  • Ақуыз негізіндегі құрамда иммуноглобулиндер, альбумин немесе эндогендік биотин жоқ, бұл оны дәстүрлі блокаторлар сәтсіз болатын көптеген жағдайларда үйлесімді етеді.
  • Стрептавидин жүйесімен бірге қолдануға арналған биотинсіз
  • 10 минуттан аз уақыт ішінде блоктайды
  • Ағымдағы блоктау буфері бар жоғары фон
  • Сүтқоректілердің үлгілерін қамтитын анықтау әдістерінде пайдалы.
  • Флуоресцентті бейнелеуді қамтитын қолданбаларда әсіресе тиімді
  • Сүтқоректілердің үлгілері
  • Флуоресценциялық вестерн блотинг

Тазартылған сиыр сарысуы альбумині

  • Жоғары сапалы сиыр сарысуы альбуминінің 10% ерітінділері
  • Бір реттік тазартылған ақуыз сарысу немесе сүт ерітінділеріне қарағанда талдау компоненттерімен айқаспалы реакцияның аз мүмкіндігін қамтамасыз етеді.
  • Фосфо- белоктарға бағытталған кезде қолданыңыз
  • Қайта пайдаланылған антиденелерді блокаторда сақтау кезінде қолданған дұрыс
  • Бір протеинді блоктайтын буфер сарысу немесе сүт ерітінділеріне қарағанда талдау компоненттерімен айқаспалы реакцияның аз мүмкіндігін қамтамасыз етеді.
  • Майсыз сүт блокаторларымен жоғары фон көрінгенде пайдаланыңыз
  • Майсыз ұнтақ сүттің қолдануға дайын 5% ерітіндісі
  • Ыңғайлылық – пайдалануға дайын
  • Үйде жасалған блокаторларға қарағанда тұрақты өнім

Протеинді блоктаушы емес қосылыс

  • Протеин негізіндегі блоктау буферлерімен байланысты айқаспалы реактивтілікті азайтады немесе жояды.
  • Үлгі-антиденелер комбинациясы айқаспалы реакцияны немесе қажетті зонд функциясының сөнуін болдырмау үшін талдау жүйесіндегі барлық ықтимал экзогендік жануар ақуыздарын жоюды талап етеді.
  • Протеин негізіндегі блокаторлар жоғары фон тудырған кезде қолданыңыз

Иммунореактивтілігі төмен антиденелер үшін мембраналық емдеу

  • Нитроцеллюлоза мембраналарын алдын ала өңдеу
  • Зондтау үшін қажетті бастапқы антидене мөлшерін азайтады
  • Бастапқы антидене әдетте қызығушылық танытатын ақуызды анықтау үшін қолданылатыннан 3-100 есе аз бастапқы антидене болған кезде пайдаланыңыз.

Қызықтыратын ақуыздарды зерттемес бұрын, антиденелердің спецификалық емес байланысуын болдырмау үшін мембрананың қалған байланыстырушы бетін жабу керек. Әйтпесе, антиденелер немесе басқа анықтау реагенттері бастапқыда қызығушылық танытатын ақуыздарды иммобилизациялау үшін қызмет еткен мембранадағы кез келген қалған жерлермен байланысады. Негізінде талдаудағы мақсатқа немесе зонд құрамдастарына байланыстыруға жақындығы жоқ кез келген ақуызды блоктау үшін пайдалануға болады.

Мембранадағы бос орындарды блоктау үшін сүт немесе қалыпты сарысудан жоғары тазартылған ақуыздарға дейінгі әртүрлі блоктаушы буферлерді пайдалануға болады. Идеалды блоктаушы буфер спецификалық емес өзара әрекеттесудің барлық әлеуетті учаскелерімен байланысады, антиденелерді байланыстыру үшін эпитопты өзгертпестен немесе бүркеместен фонды толығымен жояды. Блоктау буферлері антиденелердің байланысуына және спецификасына әсер етуі мүмкін, сондықтан оңтайландыру қажет. Бірде-бір ақуыз немесе белоктар қоспасы барлық Western blot эксперименттері үшін жақсы жұмыс істейді және нақты антиденелер, мембрана түрі және субстрат жүйесінің берілген комбинациясы үшін ең жақсы нәтижелерді алу үшін эмпирикалық сынақ қажет.


Әмбебап және базальды буфердегі рестриктазалардың салыстырмалы белсенділігі

Біздің шектеу ферменттеріміз оңтайлы әмбебап буфермен қамтамасыз етілген (төмендегі кестеде көк түспен көрсетілген бес әмбебап буфердің бірі). Басқа әмбебап буферлердің әрқайсысында салыстырмалы белсенділік оңтайлы буферге дейін нормаланады, мұнда оңтайлы буфердегі әрбір ферменттің белсенділігі 100% түрінде көрсетіледі. ( ) ішіндегі мәндер жұлдыз белсенділігі әсер етуі мүмкін буферлерді көрсетеді. Бұл әсерлерді болдырмау үшін көк немесе қызғылт түспен белгіленген буферлерді пайдалану ұсынылады.

Бірнеше арнайы ферменттер (AccIII, BalI, BcnI, BglI, Bpu1102I, Cfr10I, Eco52I, NruI, PshBI, SnaBI, SspI, TaqI және VpaK11BI) әрқайсысы белгілі бір ферментке мамандандырылған базальды буфермен қамтамасыз етілген. Бұл базальды буферлердің құрамы ферментке байланысты өзгереді.

Шектеу ферменті Салыстырмалы әрекеттер (%)
ЛМХҚT + BSAБазальды***
AatII <20 <20 <20 <20 100 120
AccI 20 100 <20 (<20) 160 80
AccII (260) 100 <20 20 200 160
AccIII (<20) (<20) 20 (80) (<20) 100
AfaI 60 60 40 60 100 100
AflII 20 80* <20 <20 140 120
AluI 100 100 <20 40 200 120
Aor13HI <20 20 <20 80 * 80 100
Aor51HI 80 100 <20 20 120 120
АпаI 100 <20 <20 <20 <20 120
АпаЛИ 100 20 <20 <20 120 120
AvaI (<20) 100 20 40 100 120
AvaII 80 100 <20 20 100 100
БалI 20 20 <20 <20 40 100
BamHI (<20) <20 40 100 (<20) 80
БанII (120) (120) 100 80 (100) 100
BcnI <20 20 40 60 60 100
BglI <20 <20 20 40 <20 100
BglII <20 20 100 (100) (60) 100
BlnI <20 20 40 100 20 120
BmeT110I <20 <20 20 100 <20 140
BmgT120I <20 <20 100 40 <20 240
Bpu1102I <20 <20 <20 40 60 100
BspT104I 100 60 <20 <20 100 120
BspT107I <20 20 80 100 20 100
Bsp1286I 100 20 <20 <20 60 100
Bsp1407I 20 60 20 20 100 100
BssHII 100 100 60 20 140 100
BstPI (<20) (60) 100 (100) (100) 100
BstXI <20 40 100 <20 <20 120
Bst1107I (<20) 60 100 100 40 100
Cfr10I (<20) (<20) (<20) 40 (20) 100
ClaI 40 100 120 100 60 100
CpoI <20 <20 80 100 <20 100
DraI 100 100 60 100 80 80
EaeI 60 100 <20 <20 120 160
EcoO65I (20) (60) 60 * 40 40 100
EcoO109I 100 60 <20 <20 100 160
EcoRI (20) (100) 100 (120) (80) 120
EcoRV (<20) (40) 100 (120) (40) 100
EcoT14I (<20) (40) 100 120 (60) 100
EcoT22I <20 20 100 (140) (20) 120
Eco52I <20 <20 <20 <20 <20 100
Eco81I <20 100 <20 <20 100 160
FbaI (<20) (<20) (80) 100 (20) 100
FokI (20) (60) <20 <20 (200) 100
HaeII 80 100 <20 80 140 100
HaeIII 60 100 100 60 100 100
Бақытты II 100 60 <20 <20 100 80
ХхаИ 80 100 100 120 120 100
HincII 20 100 20 40 100 80
Үнді III (60) 100 <20 200 (100) 80
HinfI 80 100 100 160 60 100
Hin1I 40 80* <20 20 60 160
HpaI <20 (40) 20 100 (80) 100
KpnI 100 60 <20 <20 (100) 80
MboI 20 40 60 100 40 100
MboII 100 60 <20 <20 60 100
MflI 100 80 <20 <20 80 100
MluI 60 60 100 (100) 60 100
MspI 80 80 <20 100 100 80
МунИ (200) 100* <20 <20 160 100
MvaI (<20) (40) 80 100 (20) 120
НаИ 100 <20 <20 <20 100 120
NcoI (40) (60) 20 60* (60) 160
NdeI <20 40 100 100 80 100
NheI (120) 100 <20 <20 (160) 100
Мен емес (<20) (<20) 20** <20 (<20) 100
NruI 0 <20 20 20 <20 100
NsbI 40 20 <20 60 100 100
PmaCI 100 80 <20 <20 100 100
ПшаАИ 20 40 <20 100 60 160
PshBI (20) (40) 20 40 40 100
Psp1406I 20 60 <20 <20 100 100
PstI (<20) (60) 100 80 (20) 80
PvuI (<20) (20) (40) 80* (40) 120
PvuII (80) 100 40 <20 (40) 100
SacI 100 60 <20 <20 80 80
SacII 40 20 <20 <20 100 40
СалІ <20 <20 100 (20) <20 120
Sau3AI (60) 80 100 <20 (80) 100
ScaI (<20) (<20) 100 (60) (<20) 100
SfiI (40) 100 <20 <20 100 100
SmaI <20 <20 <20 <20 100 100
SmiI <10 <20 100 40 <10 100
SnaBI (20) (40) <20 <20 (40) 100
SpeI (80) 100 80 100 (80) 100
SphI (20) (40) 100 120 (20) 100
Sse8387I (120) 60* <20 <20 (60) 100
SspI (<20) (60) 40 (100) (80) 100
StuI 60 100 60 80 140 100
TaqI 40 80 60 60 80 100
Tth111I (20) 80 40 100 (80) 120
Van91I <20 (20) 60 100 (60) 100
VpaK11BI <20 <20 60 (40) <20 100
XbaI <20 80* 20 <20 120 120
ХоI <20 60 100 160 60 100
XspI <20 60 <20 100 160 100

Көк: шектеу ферментімен қамтамасыз етілген буфер
Қызғылт: пайдалану үшін ұсынылған балама буфер

*+0,01% BSA &rarr 100% AflII, EcoO65I, FokI, Hin1I, MunI, NcoI, PvuI, SplI, Sse8387I, XbaI
**+0,01% BSA + 01% Triton X-100 &rarr 100% Ескерту
*** Базальды буферлердің құрамы ферментке тән.


Буферлер*# - Биология

PHEM (500 мл) 2x
18,14 г Құбырлар
6,5 г гепес
3,8 г EGTA
0,99 г MgSO 4
pH 7,0 w/ KOH

PBS (500 мл-де 5 рет)
20,45 г NaCl
0,465 г KCl
10,142 г Na 2 HPO 4 *7 H2О
0,545 г KH 2 PO 4
рН 7,2

Орнату медиасы
20 мМ Tris pH 8,0
0,5% N-пропилгаллат
90-37 Глицерин
4oC температурада сақтаңыз

PM буфері*
100 мл 1 М ҚҰБЫРЛАР (100 мМ ҚҰБЫРЛАР рН= 6,9)
2 мл 1 М MgSO 4 , (2 мМ MgSO 4 )
2 мл 0,5 М EGTA (1 мМ EGTA,)
тазартылған су 900 мл дейін
рН мәнін 6,9-ға реттеңіз
тазартылған су 1 литрге дейін
4oC температурада сақтаңыз

Валап*
50 г вазелин, 50 г ланолин және 50 г парафинді (бәрі Фишерде бар) 1 л пирекс стаканға салыңыз.
Барлық құрамдас бөліктер ерігенше және жақсылап араластырылғанша, мезгіл-мезгіл араластыра отырып, «төмен» күйде қыздырыңыз.
Бірнеше кішкене бұрандалы қақпақ банкаларға құйыңыз (сыйымдылығы ㅪ мл)
Бөлме температурасында сақтаңыз

20 x энергияны қалпына келтіру жүйесі*
150 мМ креатинфосфаты (Boehringer �)
2 мл 100 мМ MgATP қоры (20 мМ ATP, 20 мМ MgSO) 4 )
40 мл 0,5 М EGTA (2 мМ EGTA)
тазартылған су 10 мл дейін
100 мл аликвоттарға салып, -20oC температурада сақтаңыз

Оқшаулау буфері*
20 мл 5 М NaCl қоры (0,1 М NaCl)
4 мл 1 М MgSO 4 Қор (4 мМ MgSO 4 )
2 мл 0,5 М ЭДТА (1 мм ЭДТА)
10 мл 1 М HEPES қоры (10 мМ HEPES)
тазартылған су 900 мл дейін
рН мәнін 7,0-ге реттеңіз
тазартылған су 1 литрге дейін
4oC температурада сақтаңыз

Жоғары тұзды буфер*
120 мл 5 М NaCl қоры (0,6 М NaCl)
4 мл 1 М MgSO 4 Қор (4 мМ MgSO 4 )
2 мл 0,5 М ЭДТА (1 мм ЭДТА)
10 мл 1 М HEPES қоры (10 мМ HEPES)
тазартылған су 900 мл дейін
рН мәнін 7,0-ге реттеңіз
тазартылған су 1 литрге дейін
4oC температурада сақтаңыз

10 x баған буфері*
500 мл 1 М ҚҰБЫРЛАР қоры (250 мМ ҚҰБЫРЛАР)
40 мл 0,5 М EGTA қоры (10 мМ EGTA)
40 мл 1 М MgSO 4 Қор (5 мМ MgSO 4 )
тазартылған су 1800 мл дейін
рН мәнін 6,7-ге реттеңіз
тазартылған су 2 литрге дейін
4oC температурада сақтаңыз

Гомогенизация буфері*
300 мл PM буфері
52,3 мг PMSF (1мМ PMSF)
3 г лейпептин (10 мг/мл лейпептин)
300 мг пепстатин А (1 мг/мл пепстатин А)
3 мг TAME (10 мг/мл TAME)
еріту үшін жақсылап араластырыңыз, дереу қолданыңыз

PMG буфері*
80 мл 1 М ҚҰБЫРЛАР қоры (80 мМ ҚҰБЫРЛАР)
2 мл 1 М MgSO 4 Қор, (2 мМ MgSO 4 )
2 мл 0,5 М EGTA қоры (1 мМ EGTA,)
600 мл глицерин
тазартылған суды 900 мл, жақсылап араластырыңыз
рН мәнін 6,9-ға реттеңіз
тазартылған су 1 литрге дейін
4oC температурада сақтаңыз

PBS*
8,18 г NaCl (140 мМ NaCl)
0,186 г KCl (2,5 мМ KCl)
0,218 г KH 2 PO 4 (1,6 мМ KH 2 PO 4 )
2,15 г Na 2 HPO 4 (15 мМ Na 2 HPO 4 )
тазартылған су 1 литрге дейін
Бөлме температурасында сақтаңыз

1М MgSO4 Қор*
24,074 г MgSO 4
тазартылған су 200 мл дейін
бөлме температурасында сақтаңыз

1 M HEPES, рН = 7,0 Қор*
119,15 г HEPES (бос қышқыл)
тазартылған су 400 мл дейін
рН Ӳ,8 болғанша араластыра отырып, қатты NaOH бір мезгілде бірнеше түйіршіктерді қосыңыз.
рН = 7,0 жету үшін концентрлі NaOH тамшылатып қосыңыз
тазартылған су 500 мл дейін
стерильді сүзгіден өткізіп, 4oС температурада сақтаңыз

1 М ҚҰБЫРЛАР, рН = 6,9 Қор*
151,2 г ҚҰРУЛАР (бос қышқыл)
тазартылған су 400 мл дейін
рН Ӳ,7 болғанша араластыра отырып, қатты NaOH бір мезгілде бірнеше түйіршіктерді қосыңыз.
рН = 6,9 жету үшін концентрлі NaOH тамшылатып қосыңыз
тазартылған су 500 мл дейін
зарарсыздандырылған сүзгі және 4oC температурада сақтау

0,5 М EDTA қоры*
16,81 г ЭДТА (натрий тұзы)
тазартылған су 90 мл дейін
рН мәнін 7,0-ге реттеңіз
Дистилденген су 100 мл
Бөлме температурасында сақтаңыз

0,5 М EGTA қоры*
19,02 г EGTA (натрий тұзы)
тазартылған су 90 мл дейін
рН мәнін 7,0-ге реттеңіз
100 мл дейін тазартылған су
Бөлме температурасында сақтаңыз

1М дитиотрейтол (ДТТ)*
1,542 г дитиотрейтол
тазартылған су 10 мл дейін
500 мл аликвоттарға салып, -20oC температурада сақтайды

1 М KCl қоры*
74,55 г KCl
тазартылған су 1 литрге дейін
бөлме температурасында сақтаңыз

10 М NaOH қоры*
40 г NaOH
тазартылған су 100 мл дейін
бөлме температурасында сақтаңыз

100 мМ MgGTP қоры*
Сізде бар GTP лотының формула салмағын тексеріңіз, 10 мл 100 мм ерітіндіге қажетті мөлшерді анықтаңыз.
анықталған мөлшерге дейін 8,5 мл тазартылған су қосыңыз
1 мл 1М MgSO қосыңыз 4 Қор
рН мәнін 7,0-ге реттеу,
тазартылған су 10 мл дейін
200 мл аликвоттарға бөліңіз, -20oC температурада сақтаңыз

100 мМ MgATP қоры*
Сізде бар АТФ партиясының формула салмағын тексеріңіз, 10 мл 100 мм ерітіндіге қажетті мөлшерді анықтаңыз.
анықталған мөлшерге дейін 8,5 мл тазартылған су қосыңыз
1 мл 1М MgSO қосыңыз 4 Қор
рН мәнін 7,0-ге реттеңіз
тазартылған су 10 мл дейін
200 мл аликвоттарға бөліңіз, -20oC температурада сақтаңыз

5 М NaCl қоры*
292,2 г NaCl
тазартылған су 1 литрге дейін
бөлме температурасында сақтаңыз

3,6 мМ Брефельдин А*
10 мг Брефелдин А (Epicenter Technologies Madison, WI-да қол жетімді)
абсолютті этанол 12 мл дейін
-20oC температурада сақтаңыз

30 x NaF*
378 мг NaF (0,9 М NaF)
тазартылған су 10 мл дейін
-20oC температурада сақтаңыз

30 x AlCl3*
20 мг (1,5 мМ AlCl 3 )
тазартылған су 100 мл дейін
Бөлме температурасында сақтаңыз

30 мМ мг GTP-g-S*
10 мг GTP-g-S тетралитий тұзы (Boehringer Mannheim 覔 467 қол жетімді)
18 мл 1 М MgSO 4 Қор (30 мМ MgSO 4 )
572 мл тазартылған су қосыңыз (592 мл дейін)
-20oC температурада сақтаңыз


150 мМ Мг AMP-PNP*
25 мг AMP-PNP (Boehringer Mannheim 褞 547 қол жетімді)
90 ул 1 М MgSO 4 Қор (150 мМ MgSO 4 )
225 мл тазартылған су қосыңыз (315 мл дейін)
-20oC температурада сақтаңыз


100 мМ натрий ортованадаты*
1,839 г натрий ортованадаты
бұрандалы қақпағы бар түтікте 8 мл дейін тазартылған су
рН мәнін 10-ға реттеңіз
ерітінді сары болса, мөлдір болғанша қайнаған суға салыңыз
рН қайта тексеріңіз, қажетінше қайталаңыз
A265 нм, ext. коэфф.= 2925М-1см-1және қажетінше тазартылған суды қосады
-20oC температурада сақтаңыз


3 M KI*
4,98 г KI
10 мл дейін тазартылған суды қосыңыз
бөлме температурасында сақтаңыз


0,5 М Na2CO3*
531 мг Na 2 CO 3
10 мл дейін тазартылған суды қосыңыз
бөлме температурасында сақтаңыз

L B Сорпа
1 литр ddH 2 О, біріктіріңіз:
10 грамм бакто-триптон
5 грамм бакто-ашытқы сығындысы
5 грамм NaCl
Ерігенше араластырыңыз.


Бейнені қараңыз: Ферменттер (Шілде 2022).


Пікірлер:

  1. Cingeswiella

    Бәрі жақсы, соңы жақсы.

  2. Akikree

    Super Duper

  3. Shadoe

    I can recommend that you visit the site, which has many articles on the topic that interests you.



Хабарлама жазыңыз