Ақпарат

Адам мен шошқадағы Лейдиг жасушасының морфологиялық айырмашылығы неде?

Адам мен шошқадағы Лейдиг жасушасының морфологиялық айырмашылығы неде?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Шошқа тек мысал, жәй жануар. Лейдиг жасушаларында негізінен кристалданған липофусциннен жасалған ақуыз қосындылары (Рейнке кристалдары) бар. Олар секреторлық қосындылар, яғни секрециялық жасушаларда түзілетін жасушалар.

Шошқаның аталық безіндегі Лейдиг жасушасының мысалы:

Ұстазым маған адам мен жануарлардың кейбір жасушаларының өмір сүруінде айырмашылық бар екенін айтты. Дегенмен, мен мұндай айырмашылықты таба алмаймын. Маған адамның Лейдиг жасушасының слайды берілмеді, сондықтан мен салыстыра алмадым.

Адам мен шошқадағы Лейдиг жасушасының морфологиялық айырмашылығы неде?


Бәлкім, сіздің мұғаліміңіз Лейдиг жасушаларының морфологиясындағы айырмашылықты емес, сонымен қатар айырмашылықты меңзеген болуы мүмкін интерстициальды ұлпалардың морфологиясы, яғни. тұқымдық түтіктер арасындағы кеңістікті алып жатқан ұлпа. Лейдиг жасушалары оның ең қызықты құрамдас бөлігі болып табылады, басқалары - ұсақ қан тамырлары (олардың көпшілігі), нервтер және дәнекер тіндері (негізінен фибробласттар, мастоциттер, лимфоциттер және макрофагтар). Әртүрлі түрлерде интерстициалды ұлпа әртүрлі көрінеді, мысалы:

  • Лейдиг жасушалары қан тамырларының айналасында түйіршіктер түзеді және фибробласттармен қоршалған (бұл оларды оқшаулауды қиындатады) теңіз шошқасында, бірақ тышқандар мен егеуқұйрықтарда емес;
  • адамда интерстициалды ұлпалардың көп бөлігі жасушадан тыс зат болып табылады, Лейдиг жасушалары жиі емес, бірақ белсендірек;
  • және, ең бастысы, шошқада өте оңай оқшауланатын (және көп мөлшерде эстроген өндіретін) жасушадан тыс заттар аз және Лейдиг жасушалары көп.

Мен мұның бәрін ескі лекция конспектілерінен таптым; Мен ешқандай ақылға қонымды сілтеме таба алмадым.


Мен Лейдиг жасушалары туралы барлық қолжетімді әдебиеттерді (Университет кітапханасы арқылы) зерттедім және сіздің мұғаліміңізде жануарлардың әртүрлі үлгілеріндегі Лейдиг жасушалары бойынша морфологиялық зерттеулерді қорытындылайтын бұл мақала болуы мүмкін деп ойлаймын.

Айтпақшы, Лейдиг жасушаларын зерттеуге арналған жануарлардың ең көп таралған үлгілері егеуқұйрықтар, тышқандар және шошқалар болып табылады.

Егеуқұйрықтардағы Лейдиг жасушаларының дамуы екі фазалы болды: ұрықта Лейдиг жасушаларының популяциясының дамуы және оның жетілген жасушаларға айналу кезінде деградациясы. Бұл адамның Лейдиг жасушаларына да қатысты деп ұзақ уақыт бойы сенген. Дегенмен, шошқалар мен маймылдарға жүргізілген кейбір зерттеулер ұрықтың және неонатальды дамудың ауысуы арасында кейде жасуша деградациясының қосымша фазасын дәлелдеді. Бұл деректер келесі суретте жинақталған (сілтеме қағаздан алынған):

Осылайша, егеуқұйрықтар мен адамдардың Лейдиг жасушаларын бір ұрық жасындағы немесе туылғаннан кейін көп ұзамай (неонатальды уақыт) салыстыру арқылы сіз Лейдиг жасушаларының деградациясын көре аласыз - олардың мөлшері азаяды және олардың көпшілігі өледі - қалыптымен салыстырғанда егеуқұйрықтардағы бұл жасушалардың күйі.


Алтын хомяктың қартаюындағы ерте өзгерістерді морфологиялық және морфометриялық зерттеу.

Жасы жетілген алтын хомяк аталық безінің гистологиялық және морфометриялық ерекшеліктері зерттеліп, ересек жануарлармен салыстырылды. Жарық микроскопиясы арқылы үш жас тобы (6, 12 және 18 ай) зерттеліп, тестостерон деңгейі анықталды. Бақылаулар 12 айдан кейін шамалы гипосперматогенезбен және десквамациямен байқала бастаған шәует түтіктерінің үдемелі инволюциясын көрсетті. 18 айлық үлгілерде дегенерация анағұрлым маңызды болды және гистопатологиялық зақымданулар аздаған гипосперматогенезден жыныс жасушаларының болмауына дейінгі аралықта 6 балдық шкала бойынша жіктелуі мүмкін. Бұл инволютивтік өзгерістер аталық безде біркелкі таралмаған, қалыпты болып көрінетінге жақын түтікшелер болған. Морфометриялық нәтижелер 3 жас тобында қан тамырларының сперматозоидтарының, пахитенді сперматоциттердің және Сертоли мен Лейдиг жасушаларының (соңғылары тек 18 айлық топта айтарлықтай азайған) үдемелі азаюын көрсетеді. Морфометриялық мақсаттар үшін түтікшелердің дегенерациясының 7 балдық шкаласы қолданылды, ол жасына байланысты неғұрлым азғындалған түтікше кезеңдері болған кезде айтарлықтай өсуді көрсетеді. Морфометриялық айнымалылар арасында бірнеше корреляция табылды, олар жас және осыған байланысты бірнеше аталық жасушалар түрлерінің азаюы және люмен диаметрі арасындағы бар қатынастарды сипаттайды. Қан сарысуындағы тестостерон деңгейінде топтар арасында айтарлықтай айырмашылықтар табылған жоқ. Қорытындылай келе, жасына байланысты гистологиялық өзгерістер 18 айлық жануарларда айқын байқалады, ал 12 айда жыныс жасушаларының санының төмендеуі және сперматозоидтардың өндірісі анықталады.


Фон

Сүтқоректілердің көпшілігі сияқты тышқандарда лейдиг жасушаларының екі ұрпағы ұрықтың қалыпты дамуы кезінде пайда болады. Аталық без дифференциациясынан кейін көп ұзамай пайда болатын «ұрық» популяциясы жатырда және 7-ші күні туғаннан кейін пайда болатын «ересек» популяция [1-3]. Ересек Лейдиг жасушаларының морфологиялық және функционалды жетілуі лютеинизация гормонының (LH) стимуляциясына өте тәуелді және бұл айналымдағы LH немесе LH-рецепторлары жоқ тышқандарда анық көрінеді [4-7]. Бұл жануарларда Лейдиг жасушаларының саны туғаннан кейін қалыпты дамымайды және айналымдағы андроген деңгейі төмен немесе анықталмайды [6-9]. Керісінше, гонадотропиндері жетіспейтін жануарларда ұрықтың дамуы кезінде аталық андроген деңгейі мен Лейдиг жасушаларының саны қалыпты [8,9], бұл Лейдиг жасушаларының ұрық популяциясы осы кезеңде гонадотропиндерді қажет етпейтінін көрсетеді. Постнатальды аналық бездегі ересек Лейдиг жасушаларының көбеюі мен жетілуіндегі LH-ның айқын рөліне қарамастан, бұл гормонның ересек Лейдиг жасушаларының дифференциациясының басталуы үшін маңызды екендігі белгісіз. Ерте зерттеулер LH дифференциация процесі үшін қажет екенін көрсетті [10-12], ал соңғы уақытта иммуногистохимиялық зерттеулер LH рецепторлары анықталғанға дейін егеуқұйрықтардың ересек Лейдиг жасушасының прекурсорларында арнайы стероидогендік ферменттер анықталатынын хабарлады [13]. Бұл дәлелдер Лейдиг жасушаларының дифференциациясының LH-стимуляциясы болмаған кезде басталатынын көрсетеді, дегенмен дифференциацияға дейін рецепторлардың төмен, анықталмайтын деңгейлері болуы мүмкін. Әрине, Лейдиг жасушасының прекурсорлық жасушалары LH-рецептор генін айқын дифференциациядан бұрын экспрессиялайды, дегенмен транскрипттердің аударылғаны немесе функционалды ақуызды шығаратыны анық емес [14-16].

Тінтуірдің мРНҚ түрлерінде VI типті 3-гидроксистероид дегидрогеназаны (3'HSD VI), 17'-гидроксистероид дегидрогеназаны III типті (17'HSD III), простагландинді (PG), D-тазаны кодтайтыны бұрын көрсетілген. эстроген сульфотрансферазасы (EST) және тамыр жасушаларының адгезиясының 1 молекуласы (VCAM 1) ұрық популяциясында емес, тек ересек Лейдиг жасушасының популяциясында көрінеді [1,17-20]. Сондықтан бұл маркерлерді гонадотропин-стимуляциясы жоқ тышқандарды пайдалана отырып, ересек Лейдиг жасушаларының дифференциациясын бастаудағы LH рөлін зерттеу үшін пайдалануға болады. Гонадотропиндері жоқ тышқандарда бұл маркерлердің экспрессиясы Лейдиг жасушаларының дифференциациясы LH стимуляциясын қажет етпейтінінің айқын дәлелі болар еді. Дегенмен, LH-стимуляциясы болмаған кезде ересек Лейдиг жасушалары бар болса да, бұл ерекше маркерлердің экспрессиясы өте төмен болады немесе жоқ болады, өйткені жалпы Лейдиг жасушаларының белсенділігі LH арқылы анықталады [21]. Гонадотропин тапшылығы бар тышқандарды hCG-мен емдеу ересек Лейдиг жасушалары бұрыннан бар болса, 24 сағат ішінде маркерлер экспрессиясының жылдам артуына әкелуі мүмкін. Егер жасушалар дифференциацияланбаса, Лейдиг жасушаларының дифференциациясын және маркерлердің экспрессиясын индукциялау үшін емдеудің ұзағырақ кезеңі қажет болуы мүмкін. Осы себептерге байланысты ересек Лейдиг жасушаларының маркерлерінің экспрессиясы гонадотропин жетіспейтін гонадотропин-релизинг гормонында (GnRH) зерттелді.hpg) тышқан. Бұл жануардың рецепторлары жетіспейтін үлгілерден артықшылығы бар, өйткені жыныс бездері экзогендік гормондармен емдеуге жауап береді.


Дің жасушаларынан ересек лейдиг жасушаларының дамуы

Егеуқұйрықтарда босанғаннан кейінгі алғашқы 2-3 апта ішінде ұрықтың Лейдиг жасушалары біртіндеп ересек Лейдиг жасушаларымен ауыстырылады [8, 21]. Ересек Лейдиг жасушаларының дамуы ұрықтың Лейдиг жасушаларынан тәуелсіз, керісінше жасушалар дің жасушаларынан пайда болды деп болжанған [18, 22, 23]. Мэттью Харди мен оның әріптестерінің жұмысы ересек егеуқұйрықтың Лейдиг жасушалары шынымен ерте неонатальды (босанғаннан кейінгі 7 күн) аталық безінің дің жасушаларынан дамитынын көрсетті [24]. Бұл зерттеушілер неонатальды егеуқұйрық аталық безінде 3βHSD-теріс, LHR-теріс және тромбоциттерден алынған өсу факторы рецепторлары α (PDGFRα)-оң жасушалар бар екенін көрсетті. Олар әсер ететін in vitro жағдайларына байланысты бұл жасушалардың шексіз көбею (өзін-өзі жаңару) немесе 3β-HSD оң болып, ақырында тестостерон өндіру үшін дифференциациялану қабілеті бар екені көрсетілді. Бұған қоса, ересек егеуқұйрық аталық бездерінің интерстициалды бөліміне трансплантацияланған кезде жасушалар in vivo дифференциацияланып, 3β-HSD оң болады.

Жаңа туылған нәрестелердегі аталық жасушалардан ерекшеленбейтін дің жасушалары да ересек аталық бездердің ұрық түтіктері мен қан тамырларын қоршайтыны көрсетілген [25]. Бұл жасушалар оқшауланған және неонатальды аталық бездің дің жасушалары сияқты, шексіз уақыт бойы өзін-өзі жаңартуға қабілетті немесе тестостеронды ажыратып, түзе алатындығы анықталды [25]. Жақында жүргізілген зерттеуде біз ересек егеуқұйрықтан алынған бағаналы Лейдиг жасушалары эпидермиске емес, жатыр мен простата эпителийіне ауыса алатынын хабарладық [26]. Ересек жасушаларды жою үшін этан диметан сульфонатын немесе генетикалық тәсілдерді қолданатын Лейдиг жасушаларының абляциялық зерттеулері де біздің ересек Лейдиг жасушаларының шығу тегі туралы түсінуімізге ықпал етті [27, 28]. Бұл зерттеулер ересек дің жасушалары әдетте тыныш болса да, ересек жасушалардың эксперименталды түрде жойылғаннан кейін жаңа Лейдиг жасушаларын қалпына келтіретінін көрсетті. Дегенмен, әдетте ересек аталық бездің дің жасушаларының атқаратын рөлі белгісіз.


Салыстырмалы көбею

Соматикалық жынысты анықтау

Соматикалық жыныстық сәйкестілік жыныстық хромосоманың кариотипінің төменгі ағынында анықталады және гонадогенезге дейін ерте эмбриогенез кезінде анықталады. XX аналықтары өрнекті белсендіреді Sxl, ерте эмбриональды промотордан алынған негізгі жыныстық реттеуші ген, Sxl-Pe, ядролық цикл 12-де, PGC пайда болғаннан кейін көп ұзамай. Осыдан кейін Sxl кеш промоутердің сөзі, Sxl-Pm, екі жыныста да ядролық цикл 14-те, соматикалық жасушадан кейін және аналық-зиготикалық ауысу толық белсендірілгеннен кейін. XX әйелдерде Sxl протеинінің болуы авторегулярлық циклды күшейтеді, онда ол байланысады. Sxl транскрипттерді жасайды және ерте тоқтату кодоны бар экзонның өткізіп жіберуін тудырады, осылайша функционалды Sxl ақуызының үздіксіз синтезіне мүмкіндік береді. Sxl XY еркектеріндегі транскрипттерде ерте тоқтату кодоны бар, сондықтан олар функционалды ақуызды шығара алмайды. Sxl төменгі ағынында Tra/Tra2 қатысатын балама қосылыс оқиғаларының каскады, сайып келгенде, Dsx F транскрипция факторының әйелге тән изоформасын жасайды, ал әдепкі изоформа Dsx M еркектерге тән. Бұл жынысқа тән Dsx изоформалары соматикалық жыныстық дифференциацияның көпшілігіне нұсқау береді (Oliver, 2002).


Талқылау

Ұрық және ересек Лейдиг жасушаларын әртүрлі жасуша популяцияларына жататын деп анықтайтын бастапқы зерттеулер екі жасуша түрі арасындағы морфологиялық айырмашылықтарға негізделген [26, 27]. Бұл айырмашылықтар гормоналды немесе өсу факторының жетіспеушілігі жағдайында ұрық пен ересек жасушаларды ажырату үшін өте қолайлы емес, өйткені морфологияның өзі депривация күйіне әсер етеді. Бұл осы зерттеуде және GnRH-нөлдік тышқандардағы Лейдиг жасушаларында қалыпты ұрықтың немесе ересек Лейдиг жасушаларына ұқсамайтын көптеген үлкен липидтік тамшылар бар екенін көрсететін алдыңғы зерттеулерде [4, 9, 28] анық көрінеді. Стероидогенез деңгейі айтарлықтай төмендеген Лейдиг жасушалары [29]. Дегенмен, GnRH-нөлдік ересек Лейдиг жасушасындағы липидтік тамшылардың таралуы қалыпты ересек Лейдиг жасушасына ұқсас екенін атап өткен жөн, бірақ липидтер тамшылары үлкенірек және жиірек болады. Ересек GnRH-нөлдік тышқандардағы липидтік тамшылардың таралуы ұрықтың Лейдиг жасушаларында байқалатын тән кластерлерге ұқсамайды.

Морфологиялық маркерлер ұрықтың және ересек Лейдиг жасушаларын анықтау үшін өте қолайлы емес болғанымен, басқа зерттеулер қазіргі уақытта Лейдиг жасушаларының екі популяциясы арасында ген экспрессиясында жасуша түрлерін ажырату үшін пайдаланылуы мүмкін түбегейлі айырмашылықтар бар екенін көрсетті. Бастапқы зерттеулерде 1-типті 11β-гидроксистероид дегидрогеназа (11βHSD1) егеуқұйрықтың ересек Лейдиг жасушаларында экспрессияланатыны, бірақ ұрық жасушаларында экспрессияның жоқ екендігі көрсетілді [30, 31]. Біздің топ және басқалар тінтуірдің ұрықтың Лейдиг жасушаларында емес, ересек Лейдиг жасушаларында экспрессияланатын төрт мРНҚ түрін (3βHSD VI, EST, PGD-синтетаза және 17βHSD III) анықтау үшін кеңейтті [17-20]. Әзірге екі популяция арасындағы гендердің экспрессиясындағы анық анықталған айырмашылықтар ұрық популяциясында емес, ересек жасуша популяциясында көрсетілген гендерге қатысты [1, 17-19]. Ренинді және тромбоспондин 2-ні кодтайтындар сияқты ұрықтың Лейдиг жасушасының популяциясында жоғары дәрежеде экспрессияланатын гендер төмен деңгейде болса да, ересек аталық безде экспрессиялануын жалғастыруда [19, 32, 33]. Бұл ересек Лейдиг жасушаларының бұл гендерді төмен деңгейде экспрессиялауына немесе, ең алдымен, ұрықтың Лейдиг жасушаларының популяциясының ересек аталық безде сақталуына байланысты болуы мүмкін [19, 34-36]. Ересек Лейдиг жасушаларының популяциясында арнайы экспрессияланған, бірақ ұрықтың Лейдиг жасушаларының популяциясында емес, гендерді анықтау, алайда, ересек Лейдиг жасушаларының арнайы гормондар немесе өсу факторлары болмаған кезде дамитынын анықтауға мүмкіндік береді.

Тінтуірдегі ересек Лейдиг жасушасының популяциясының қалыпты дифференциациясы босанғаннан кейінгі 7-ші күні басталады [1-3]. LH болмаған жағдайда бұл жасушалардың қалыпты пролиферациясының бұзылуы және қалыпты стероидтық функцияның дамуы болмайтыны бұрын көрсетілген [8, 9]. Осылайша, дифференциация басталғаннан кейін ересек Лейдиг жасушалары LH-стимуляцияны қажет ететініне күмән жоқ, бірақ бастапқы дифференциация фазасының басталуындағы LH рөлі белгісіз болып қалды. Бұл зерттеудің нәтижелері, алайда, ересек Лейдиг жасушалары айналымдағы LH тапшылығы бар тышқандарда дифференциацияланатынын көрсетеді. Бұл қорытынды, ең алдымен, өңделмеген GnRH-нөлдік тышқандардың ұрықтарындағы арнайы ересек Лейдиг жасушаларының маркерлерінің өлшенген экспрессиясына негізделген. Ересек Лейдиг жасушаларының дифференциациясының барлық төрт маркерінің экспрессиясы төмен болды, бірақ ересек GnRH-нөлдік тышқандарда нақты уақыттағы ПТР арқылы анық анықталды. Локализация, бойынша орнында Осы маркерлердің екеуінің будандастыруы экспрессияның өңделмеген GnRH-нөлдік тышқан аталық безінде болғанын және интерстициальды тінге локализацияланғанын растады. Бұл деректер ересек Лейдиг жасушаларының LH тапшылығына қарамастан дифференциацияланатынының айқын дәлелі ретінде қабылдануы ересек Лейдиг жасушаларының дамуын көрсету үшін таңдалған маркерлердің шынайылығына байланысты. Бұл маркерлердің ересек Лейдиг жасушаларына тән екендігінің дәлелі 3βHSD VI және EST кодтайтын қалыпты тышқандарда мРНҚ түрлерінің дамуы кезінде нақты уақыттағы ПТР [19] [19] [және ағымдағы зерттеулермен расталған] тышқандарда даму кезінде анықталмайтынын көрсеткен алдыңғы зерттеулерден алынған. орнында гибридтеу [1], иммуногистохимиялық [20] немесе Солтүстік блоттинг [20] ересек Лейдиг жасушаларының дифференциациясы пайда болғанға дейін. Сонымен қатар, PDG-синтетаза да, 17βHSD III де ұрық/неонаталдық ұрық безінде экспрессияланғанымен, бұл экспрессия тек ұрық түтікшелерінде болады және жыныстық жетілуге ​​дейін тоқтайды, сол кезде экспрессия Лейдиг жасушаларының ересек популяциясында пайда болады [17, 18]. Қазіргі тәжірибелердегі PGD-синтетазаның экспрессиясы расталды орнында гибридизация ересек GnRH-нөлдік тышқан аталық безінің интерстициалды тініне локализациялануы керек. Осылайша, анықтауға болатындай, пайдаланылатын маркерлер ересек Лейдиг жасушаларының популяциясына тән және бұл жасушалардың GnRH-нөлдік аталық безде бар екенін көрсетеді.

Ересектердегі GnRH-нөлдік аталық бездердегі экспрессия үлгілерін қалыпты неонатальды ұрықтармен салыстыру да ақпаратты болып табылады. Егер ересек GnRH-нөлдік аталық бездерде ересек Лейдиг жасушалары болмаса және тек ұрық типті Лейдиг жасушалары болса, мРНҚ экспрессиясының жалпы үлгісі гонадотропинді қолдауы жоқ жаңа туған нәрестенің аталық безінің үлгісі болады деп күтуге болады. Іс жүзінде, P450scc және ренинді қоспағанда, экспрессия деңгейлері ересек GnRH-нөлдік аталық безде ұқсас немесе жоғары. Бұл ересек GnRH-нөлдік аталық бездегі жасушалардың ересек популяциясының дифференциациясына сәйкес келеді.

HCG емінің ересек GnRH-нөлдік тінтуірдің ұрығында ген экспрессиясына әсері де осы жануарда ересек Лейдиг жасушалары бар деген гипотезаны қолдайды. 3βHSD VI және 17βHSD III маркерлерінің экспрессиясы 12 сағат ішінде hCG 2 инъекциясынан кейін айтарлықтай артты. Аталық бездің қалыпты дамуы кезінде Лейдиг жасушаларының бастапқы дифференциациясы [шамамен 7-ші күн [2]] мен 3βHSD VI mRNA-ның алғашқы экспрессиясы (шамамен 11-ші күн [1]) және алғашқы елеулі көтерілуге ​​дейінгі ұзағырақ аралық арасында кемінде төрт күндік үзіліс болады. 17βHSD III мРНҚ деңгейінде (20 күннен кейін [19]). Егер GnRH-нөлдік тестісте тек дифференциацияланбаған прекурсорлық жасушалар болса, 3βHSD VI және 17βHSD III экспрессиясының жоғарылауы байқалғанға дейін hCG емдеудің ұзағырақ кезеңі қажет болуы мүмкін. EST және PGD кодтайтын мРНҚ түрлерінің 3βHSD VI және 17βHSD III экспрессиясынан айырмашылығы, hCG емінің 48 сағатынан кейін ғана жоғарылаған жоқ. Бұл осы екі геннің қалыпты даму кезінде кешіктірілген экспрессия үлгісін көрсететінін көрсететін алдыңғы деректерге сәйкес келеді [19].

GnRH-нөлдік тышқанда GnRH арқылы гипофизді стимуляциялаудың болмауы гипофиз синтезінің және гонадотропиндердің шығарылуының айтарлықтай төмендеуіне әкеледі [8]. Бұл LH және FSH айналымдағы деңгейлері өте төмен екенін білдіреді, бірақ олар міндетті түрде жойылмайды.Осылайша, Лейдиг жасушаларының прекурсорларының төмен деңгейдегі гонадотропинді ынталандыру мүмкіндігін жоққа шығаруға болмайды. Дегенмен, GnRH-нөлдік тышқандардағы тестостеронның интратестикулярлық деңгейлері анықталмайтынын және LH-рецепторы-нөлдік тышқандарға қарағанда төмен екенін атап өткен жөн [6, 7]. Демек, айналымдағы кез келген LH минималды деңгейде болуы керек және осылайша Лейдиг жасушаларының дамуына әсер етуі екіталай.

Егер мұнда сипатталған деректер көрсеткендей, ересек Лейдиг жасушалары LH-стимуляциясыз дамитын болса, бұл жасушалар қандай дифференциация/даму күйіне жетеді деген сұрақ туындайды. Жақында Мендис-Хандагама және Арияратне [37] ересек Лейдиг жасушаларының морфологиялық және функционалдық дамуын қарастырды. Шпиндель тәрізді, Лейдиг прекурсорлық жасушалары интерстициальды тіннің перитубулярлық аймағында кездеседі және бастапқыда сол аймақтағы прогенитор жасушаларға бөлінеді. «Жаңадан пайда болған» және «жетілмеген» ересек Лейдиг жасушаларының одан әрі дамуы жасушалардың дөңгелектенуімен және орталық интерстициальды аймаққа жылжуымен байланысты [37]. Ересек Лейдиг жасушаларының гендерінің стимуляцияланбаған GnRH-нөлдік аталық безде экспрессиясы және олардың кейбіреулерінің hCG стимуляциясына жылдам жауап беруі жасушалардың дифференциацияның бастапқы сатыларынан асып кеткенін көрсетеді және ынталандырылмаған, жетілмеген ересек жасушаның түрін көрсетуі мүмкін. Жасушалардың прогениторлық сатыдан асып кеткендігі туралы қосымша дәлелдер 3βHSD VI арқылы қамтамасыз етілген. орнында будандастыруды зерттеу, будандастыру сигналы, ең алдымен, прогениторлық жасушалар орналасқан перитубулярлық аймақта емес, орталық интерстициальды тін аймағында локализацияланғанын көрсетеді. Сондай-ақ, морфологиялық тұрғыдан танылатын Лейдиг жасушаларының жалпы саны (ұрық және ересек жасушалар арасында ешқандай айырмашылық жоқ) GnRH-нөлдік жануарда жыныстық жетілу кезеңінде екі есе өсетінін атап өту қызықты [9]. Бұл GnRH-нөлдік тышқандардағы осы кезеңдегі ересек Лейдиг жасушаларының морфологиялық дифференциациясына сәйкес келеді және жоғарыда сипатталған функционалдық деректермен байланысады.

GnRH-нөлдік тышқандардағы ересек Лейдиг жасушаларының айқын дифференциациясына қарамастан, бұл жануарлардағы Лейдиг жасушаларының жалпы саны бақылаудың шамамен 10% деңгейінде айтарлықтай төмендейді [9]. Ересек Лейдиг жасушаларының соңғы санының дамуы жетілген жасушаның прекурсорлық дифференциациясы мен пролиферациясының комбинациясы екені анық, дегенмен екі процестің салыстырмалы үлесі түсініксіз [37]. Егер осы жерде келтірілген деректер бойынша Лейдиг жасушаларының дифференциациясы негізінен LH-тәуелсіз оқиға болып табылатыны қабылданса, GnRH-нөлдік тінтуірдегі Лейдиг жасушаларының санының айтарлықтай төмендеуі жасуша дифференциациясының төмендеген рөліне және маңыздырақ рөлге сәйкес келеді. соңғы жасуша санын анықтауда пролиферация үшін. Бұл модельдің келесі салдары дифференциация LH-тәуелсіз оқиға жасушаларының пролиферациясы (соның ішінде прекурсорлар/прогенитарлық пролиферация) болса, LH-ге тәуелді болады. Бұл LH GnRH-нөлдік тышқандарда Лейдиг жасушаларының пролиферациясын тудыратынын көрсететін бұрынғы зерттеулерге сәйкес келеді [28].

Осы зерттеудің нәтижелері ересек Лейдиг жасушаларының дифференциациясы LH қажет етпейтінін көрсетеді, бірақ гормон жасушалардың функционалдық дамуы үшін және қалыпты жасуша санын орнату үшін қажет. Ересек Лейдиг жасушаларының дифференциациясының бастапқы ынталандыруы белгісіз болып қалады, дегенмен қалқанша безді ынталандыратын гормон қажет сияқты [30, 38] және Sertoli жасуша өнімдері Dhh және PDGF-A [35, 39]. Қандай басқа фактор немесе факторлар қатыстырылса да, кем дегенде кейбіреулері Сертоли жасушаларынан болуы мүмкін, өйткені бұл жасушалар Лейдиг жасушаларының реттелуіне тығыз қатысады және Лейдиг жасушаларының тіршілігі мен қызметі үшін қажет [40]

HCG инъекциясынан кейін ересек бақылаудағы GnRH-нөлдік тышқандар мен GnRH-нөлдік тышқандарда VI типті 3β-гидроксистероидты дегидрогеназа (3βHSD) және простагландин D (PGD)-синтетаза экспрессиясын көрсететін in situ будандастыру зерттеулері. GnRH-нөлдік аталық безді басқару үшін 3βHSD VI антисезімді зондтың гибридизациясы A) және жоғарырақ қуатта В) көрсетілген. C) HCG 4 инъекциясынан кейін GnRH-нөлдік тышқандардан аталық бездерге будандастыру көрсетілген. 3βHSD VI зондына гибридизация D) көрсетілген. Сезімге қарсы PGD-синтетаза зондының бақылау GnRH-нөлдік тышқандардан тестіске гибридизациясы E) көрсетілген, ал сенсорлық зондты будандастыру F) көрсетілген.


Шошқаның тестикулярлық интерстициумынан алынған дің лейдиг жасушаларын анықтау.

Тестостерон тек сперматогенез процесін сақтап қана қоймайды, сонымен қатар андрогенге тәуелді тіндердің қызметін де қорғайды [1, 2]. Сүтқоректілердің аталық бездеріндегі тестостеронды синтездеудің және секрециялаудың негізгі көзі ретінде ересек Лейдиг жасушалары (ALC) өмірлік қозғалысты қолдауда маңызды рөл атқарады [3]. Жақында ALCs Leydig дің жасушаларынан (SLCs) пайда болатыны көрсетілді [4]. Сүтқоректілердің аталық бездеріндегі ұрық түтікшелеріне жақын интерстициалды бөлімде орналасқан SLC соматикалық дің жасушаларының ең маңызды түрлерінің бірі болып табылады [5, 6].

SLC алғаш рет неонатальды егеуқұйрықтардың ұрықтарынан Ге және т.б. анықтады және байытты. (2006) және одан әрі зерттеулер болжамды тінтуір мен адамның SLC тестостерон шығаратын жасушаларға дифференциациялану қабілетіне ие екенін көрсетті [4, 7, 8]. Осы алдыңғы зерттеулерге сәйкес SLC кейбір сипаттамалары анықталды [4, 9, 10]. Біріншіден, сүтқоректілердің SLC саны өте аз болды, мысалы, 7 күндік егеуқұйрықтардың бір постнатальдық ұрықтан орташа есеппен 8500 болжамды SLC алынды [4]. Екіншіден, егеуқұйрықтардың ұрық түтікшелерінің сыртқы бетінде орналасқан SLCs in situ шпиндель тәрізді болды [4, 10]. Сонымен қатар, болжамды SLC LIF рецепторын (LIFR), тромбоциттерден алынған өсу факторы рецепторын a (PDGFR[альфа]), Nestin, Thy-1 және кейбір дің жасушаларының маркерлерін көрсетті, алайда олар 3[бета]-HSD- және лютеинизациялау болды. гормондық рецептор- (LHR-) теріс [4, 8, 10, 11]. Өкінішке орай, егеуқұйрықтарды, тышқандарды және адамдарды қоспағанда, басқа сүтқоректі жануарларда SLC зерттеулері жүргізілген жоқ.

Жасы ұлғайған сайын функционалдық LC саны азайып, тестостерон өндіру, cAMP өндіру және стероидогендік ферменттердің белсенділігі төмендейді [12, 13]. Осылайша, ерлер бедеулігі аурулары LCs дисфункциясы немесе тестостеронның бұзылуы нәтижесінде егде жастағы ерлерде пайда болуы мүмкін [14, 15]. Қазіргі уақытта андрогенді алмастыру тестостерон тапшылығын жоюдың ең тиімді терапиясы болды, дегенмен ол жүйелі емдеуді қажет етеді және өзіне тән қауіптерді тудырады [16]. SLCs өзін-өзі жаңарту және LC-ге дифференциациялау мүмкіндігіне ие болды, сондықтан бұл ауруларды SLC трансплантациясы арқылы емдеудің жаңа стратегиясын қамтамасыз етті [17].

Шошқа адам ауруын зерттеуде сүтқоректілердің моделі ретінде шешуші рөл атқарды [18, 19]. Шошқа ұрығы «белгілі стероидтарды шығаратын ең әмбебап орган» ретінде ұсынылды және адам стероидогенезінің физиологиясы мен генетикасын зерттеу үшін маңызды материал берді [20]. Дегенмен, шошқа SLC әлі оқшауланып, байытылуы керек еді. Сонымен қатар, егеуқұйрықтар мен тышқандар SLC маркерлері мен культура жүйелерін шошқа SLC-ге толығымен салыстыруға қол жеткізілмегендіктен, түрлердің айырмашылығы шошқа SLCs зерттеулерін қиындатты. Клиникалық қолдануда шошқа SLC маңыздылығына байланысты, бұл зерттеудің мақсаты жаңа туған нәрестелер шошқа ұрықтарынан SLC-ларды оқшаулау, анықтау және өсіру болды.

2.1. Шошқа аталықтарының жинағы. Зерттеуді Солтүстік-Батыс A&F университетінің Жануарларды күту және пайдалану комитеті Қытай Ұлттық денсаулық институтының зертханалық жануарларды күту және пайдалану жөніндегі нұсқаулыққа сәйкес мақұлдады. Besun agricultural industrial group Co., Ltd. компаниясынан (Янглинг, Шэньси, Қытай) 7 күндік еркек шошқалардың жас аналық бездерінің сынамалары 2% пенициллин-стрептомицин қосылған Дулбекконың фосфатты-буферлі тұзында (DPBS) зертханаға тасымалданды. P/S) ерітіндісі (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) 1 сағат ішінде. 2 айлық еркек шошқалардың аталық үлгілері Қытайдың Шэньси провинциясындағы Янлинг қаласындағы шошқа өсіру фермасынан жиналды.

2.2. Шошқа SLC оқшаулау. Шошқа SLC алу үшін ферментативті ас қорыту әдісі қолданылды. Аталық бездер алдымен жуылды және эпидидимис пен tunica albuginea жойылғаннан кейін ұсақталды. Содан кейін ұрықтың фрагменттері 5% (көлем/көлем) ұрықтың ірі қара сарысуы (FBS, Gibco, UK) және DNase I (100 [микро]г/мл Bio Basic, Маркхам) бар 0,75 мг/мл IV типті коллагеназада (Инвитроген) суспензияланды. , Канада) және инкубацияланған, 34°C температурада 90 минут бойы тұрақты шайқаумен [21]. Содан кейін жасуша суспензиясын сүзу үшін 160 және 59 [микро]м моножіпті нейлон торлары (Solarbio, Пекин, Қытай) пайдаланылды [21]. Оқшауланған жасушалар 1 мг/мл гиалуронидазамен (Инвитроген) өңделді және 20°C температурада 5 минут бойы 500 г центрифугалады. 5 минут тыныштандырылғаннан кейін суспензиялардың үстіңгі жағы баспа құралдарында тағы 15 минут тыныштандырылды. Содан кейін суспензиялардың жоғарғы жағындағы жасушалар жиналды. Соңында оқшауланған LC Dulbecco модификацияланған бүркіт ортасында өсірілді: қоректік қоспасы F-12 (DMEM/F12, Invitrogen) ортасы.

2.3. Торайлардың аталық сұйықтығын (pTF) дайындау. pTF және бастапқы LC бір көзден алынған. 7 күндік шошқалардың ұрықтары мүмкіндігінше кішкене бөліктерге кесіліп, 20 ° C температурада тіндерді гомогенизациялау арқылы pTF экстракцияланды [22]. Соңында pTF дегермге дейін 0,22 [микро]м сүзгі арқылы сүзілді.

2.4. Шошқадан оқшауланған LC мәдениеті. Оқшауланған LC тұнбалары екі ортада қайта суспензияланды: бір негізгі орта және басқа pTF ортасы (негізгі орта плюс 30% (көлем/көлем) pTF) [22]. Негізгі орта DMEM/F12, 10% (көлем/көлем) FBS, 1% (көлем/көлем) P/S және 1% (көлем/көлем) витаминдерден тұрды. Содан кейін LC 95% ауа-5% C[O.sub.2] атмосферасында 34°C температурада инкубацияланды және кем дегенде 2 апта бойы өсірілді. Мәдениет ақпарат құралдары күн сайын ауыстырылды.

2.5. Этан диметансульфонатымен (EDS) өңдеу. ЭСҚ-ны профессор Юаньцян Чжан (Төртінші әскери медицина университетінің адам анатомиясы, гистология және эмбриология кафедрасы, Қытай) ұсынған. Алдыңғы әдістерге сәйкес ЭСҚ диметилсульфоксидте (DMSO)/стерильді суда (1: 3, к/т) ерітілді [23-25]. Содан кейін бастапқы оқшауланған SLC 6 шұңқырлы пластинаға себілді және культура ерітіндісіне тиісінше 0, 0,5, 0,75 және 1,0 мг/мл EDS (соңғы концентрация) қосылды [24, 25]. Сандық нақты уақыт-ПТР (qRT-PCR) және иммунофлуоресцентті талдаулар ЭСҚ өңдеуден кейін 24 сағаттан кейін жүргізілді.

2.6. Гематоксилин және эозин (H&E) бояу және иммуногистохимиялық талдау. 7 күндік және 2 айлық еркек шошқалардың аталық сынамалары бекітіліп, сусыздандырылды және парафинге салынды. Содан кейін парафин салынған тіндер стандартты процедураларды қолданып, 5 [микро]м қашықтықта кесіліп, алдын ала қапталған шыны слайдтарға жабыстырылды. Одан кейін гистологияны бақылау үшін парафинмен ендірілген кесінділердің H&E бояуы жүргізілді [26].

Иммуногистохимия үшін 7 күндік шошқа аталық бездерінің интерстициальды жасушаларында PDGFR[альфа] экспрессиясы және осы ақуыз-оң жасушалардың түрі анықталды. Егжей-тегжейлі парафинді кесінділер парафинсіздендірілді, регидратацияланды және PBS-де шаяды. Содан кейін антигенді алу үлгілерді 0,01 М трис-этилендиамин тетрасірке қышқылы (Трис-ЭДТА рН = 9,0) ерітіндісінде 10 минут қайнатумен байланысты. Секциялар 37°C температурада 2 сағат бойы 10% есек сарысуымен инкубацияланды, содан кейін бастапқы антиденелермен (анти-PDGFR[альфа], 1:200, Абкам, Кембридж, Ұлыбритания) түнде 4°C температурада инкубациялады. және кейіннен 37°С температурада 1 сағат бойы қайталама биотинленген антиденелермен (ZSGB-BIO, Қытай) инкубациялау [27, 28]. Содан кейін ақуыз экспрессиясын анықтау үшін хромоген ретінде 3,3'-диаминобензидин (DAB, ComWin Biotech, Қытай) пайдаланылды.

Оқшауланған жасушалардың сипаттамалары иммунофлуоресценциямен бояу арқылы анықталды. Біріншіден, жасушалар 4% параформальдегидпен бекітіліп, 0,05% Triton X-100 арқылы 15 минут бойы өткізіледі. Содан кейін жасушалар түнде 4°C температурада бастапқы антиденелермен, содан кейін 2 сағат бойы сәйкес Alexa Fluor 594 конъюгацияланған қайталама антиденелермен (1 : 400, Invitrogen, АҚШ) 37°C температурада инкубацияланды. Соңында, жасушалар 4,6-диамидино-2-фенилиндолмен белгіленді (DAPI, 1: 1000 Beyotime, Қытай). Қолданылған негізгі антиденелер қоянға қарсы PDGFR[альфа] (1:200, Abcam) және тышқанға қарсы CYP17A1 (1:100, Санта-Круз, АҚШ) болды.

Барлық бояулардың барлық суреттері Nikon Eclipse 80i флуоресцентті микроскоп камерасының (Токио, Жапония) көмегімен түсірілді.

2.7. qRT-ПТР талдауы. Жалпы РНҚ ұсынылған хаттамаға сәйкес RNAiso Plus реагентін (TaKaRa, Далян, Қытай) пайдаланып, жасушалар мен шошқа аталық бездерінің тіндерінен алынды. Содан кейін кДНҚ кері транскрипциялық ПТР (RT-PCR) үшін PrimeSript[TM] RT реагент жинағы (TaKaRa) көмегімен синтезделді. Оқшауланған жасушаларды сипаттау үшін арнайы праймерлер (1-кесте) пайдаланылды. qRT-ПТР реакция жүйесі көлемі 20 [микро]л болды: 10 [микро]L SYBR[R] Premix Ex Taq II (2x) (TaKaRa), 0,8 [micro]L cDNA, 0,5 [micro]L ПТР Forward Primer (10 [микро]моль/л), 0,5 [микро]л ПТР кері праймер (10 [микро]моль/л) және 20 [микро]л жалпы көлеміне стерильді су қосылды. ПТР реакциясының шарттары келесідей болды: 95°С-та 3 минут ішінде денатурация, содан кейін 40 цикл (95°C 15 с, 60°C 30 секунд және 72°C 30 с. ).

2.8. Майдың қызыл бояуы. Липид тамшыларын визуализациялау үшін LC 4% формальдегидте (параформальдегидтен жаңадан дайындалған) 15 минут бойы бекітілді, 10 минут бойы Мұнай қызыл O бояу ерітіндісінде (0,3% Oil Red O ерітіндісі) боялады, содан кейін PBS 2 арқылы жуылды.

3 рет. Содан кейін жасушалар Nikon Eclipse 80i флуоресцентті микроскоп камерасының көмегімен түсірілді.

2.9. Статистикалық талдаулар. qRT-PCR арқылы анықталған мРНҚ өрнектері [2.sup.-[DELTA][DELTA]CT] әдісі арқылы есептелді және [бета]-актин [29] экспрессиясы арқылы қалыпқа келтірілді. Әртүрлі үлгілер арасындағы мРНҚ экспрессиясының өзгеруі SPSS (18.0 нұсқасы) (SPSS, Inc., Чикаго, IL, АҚШ) көмегімен есептелді. Әртүрлі топтардағы гендердің статистикалық айырмашылықтары ANOVA арқылы анықталды және деректер көшірмелердің орташа [+ немесе -] стандартты ауытқуы ретінде ұсынылды.

3.1. Жаңа туылған нәрестелердің шошқа ұрықтарында SLCs болды. H&E бояуы арқылы босанғаннан кейінгі 7 күндік және 2 айлық шошқа аталық бездеріндегі тестикулярлық интерстицийден бірнеше шпиндель тәрізді жасушалар табылды (1(а) сурет). Сонымен қатар, иммунохимиялық талдаулар PDGFR[альфа] негізінен босанғаннан кейінгі 7 күндік шошқалардағы тестикулярлық интерстицийде экспрессияланғанын көрсетті, ал PDGFR[альфа] 2 айлық шошқа ұрық интерстицийінде төмен болды (1-сурет(1) б)). Сонымен қатар, 7 күндік шошқа аталық бездеріндегі Нестин экспрессиясы 2 айлық аталық бездерге қарағанда айтарлықтай жоғары болды (P < 0,5) (1(c) сурет). Осы нәтижелерге сүйене отырып, біз 2 айлық шошқалардан гөрі 7 күндік шошқалардан SLC жинауды таңдадық.

3.2. Шошқа ұрық интерстициумынан оқшауланған LCs SLCs экспрессиялық маркерлері. Бастапқы СК қорыту әдісімен алынды (2(а)-сурет). Содан кейін бұл жасушаларды сипаттау үшін RT-ПТР және иммунофлуоресцентті талдау қолданылды. 2(b) суретте көрсетілгендей, RT-PCR нәтижелері оқшауланған LCs SLC немесе плюрипотентті дің жасушаларының маркерлерін (Nestin, PDGFR[альфа], GATA-4, Oct4 және LIFR) экспрессиялағанын көрсетті (2(b)-сурет). Сонымен қатар, Sertoli жасушаларының (SOX9) және сперматогониялық дің жасушаларының (PLZF) маркерлері анықталмады (2(b)-сурет), бұл LC-де бұл жасушалармен ластанбағанын көрсетеді. Нәтижелер бұл ас қорыту әдісінің тұқымдық түтіктерді жоюда пайдалы екенін көрсетті. Сонымен қатар, qRT-PCR нәтижелері LC-да LIFR және PDGFR[альфа] өрнектері шошқа ұрықтарындағыдан (P < 0.5) айтарлықтай жоғары екенін көрсетті (2(c) және 2(d)-суреттер), бұл бұл әдіс шошқа ұрықтарынан SLC байыта алды. Қорытындылай келе, SLC маркерлерін (Nestin, PDGFR[альфа], GATA-4, Oct4 және LIFR) білдіретін бастапқы оқшауланған LC болжамды SLC болды.

EDS егеуқұйрықтар мен тышқандардың аталық бездеріндегі сараланған LC-ларды арнайы жою үшін пайдаланылды [4, 8]. EDS өңдеу нәтижелеріне сәйкес, шошқа дифференциалданған LCs пайызы бастапқы оқшауланған LC-де шамамен 23% болды, ал бастапқы оқшауланған шошқа SLCs тазалығы 77% -дан астам болды (S1, S2 суреттері, https сайтында онлайн қолжетімді Қосымша материалда: //doi.org/10.1155/2017/2740272). Сонымен қатар, Nestin, PDGFR[альфа], CYP17A1 өрнектерінің qRT-PCR нәтижелері және CYP17A1 иммунофлуоресцентті талдауы одан әрі EDS шошқадағы сараланған LC-терді арнайы жоя алатынын растады (S3, S4 суреттері), бұл нәтижелерге сәйкес болды. EDS емдеуден кейінгі жасушалардың өмір сүру көрсеткіштері (S2 сурет).

3.3. Бұл оқшауланған SLC жоғары клоногендік потенциалды көрсетті. Бастапқы SLC оқшауланған болса да, олардың мәдениет жүйесі әлі анықталмады. Ағымдағы зерттеуде ортадағы негізгі компонент ретінде pTF пайдаланылды. Жеті күннен кейін 2 апталық культурадан кейін үлкейген бірнеше клондар түзілді (3(а)-сурет). Иммунофлуоресцентті талдау клондардың PDGFR[альфа] оң екенін көрсетті (3(b)-сурет). Nestin және LIFR екеуінің де экспрессиялары pTF ортасымен өсірілген шошқа SLC-де культурасыз SLC-мен салыстырғанда жоғары болды (P < 0,5) (5-сурет), бұл pTF SLCs дің жасушаларының әлеуетін сақтай алатынын көрсетеді.

3.4. Оқшауланған SLCs In Vitro өсіру кезінде LC-ге өздігінен дифференциациялану мүмкіндігін көрсетті. Негізгі ортамен өсірілген оқшауланған жасушалар 2 аптадан кейін клондар түзмеді (4(а)-сурет) және CYP17A1, шошқаның дифференциалданған LC маркері (4(b)-сурет). Оның үстіне Нестиннің де, LIFR де экспрессиялары культурасыз SLC-мен салыстырғанда 2 апта бойы негізгі ортамен өсірілген шошқа SLC-де айтарлықтай төмен болды (P < 0,5) (5-сурет). CYP17A1 экспрессиясы культурасыз SLC-ге қарағанда 2 апта бойы негізгі ортамен өсірілген шошқа SLC-ларында айтарлықтай жоғары болды (P < 0,5) (5-сурет). Oil Red O бояуы өсірілген жасушалар липидті тамшыларды бөлетінін көрсетті, бұл сонымен қатар дифференциалданған LCs маркері болды (6-сурет). Бұл нәтижелер бастапқы оқшауланған SLC негізгі ортамен өсіргенде LC линияларына дифференциациялай алатынын көрсетті, бұл болжамды SLC-тердің LC-ге өздігінен дифференциациялану мүмкіндігі бар екенін көрсетеді.

Аталық бездегі сперматогенез үшін бірнеше жасуша түрлері маңызды болды: жыныс жасушалары, сертоли жасушалары, перитубулярлы миоидтық жасушалар және АЛК [30]. ALCs сүтқоректілерде тестостерон секрециясының негізгі көзі болды, бірақ олар көбеюге қабілетсіз болды. Тестостерон сперматогенезді жанама реттейтіндей сертоли жасушаларына диффузиялай алады. Тестостеронды синтездеу процестері бұзылған кезде постмейоздық сперматидтер айтарлықтай азайған немесе жоқ [30]. Сондықтан SLCs LC дисфункциясы туындаған бедеулікті құтқару үшін өте қолайлы болды. Сонымен қатар, SLCs альгинатпен қапталған интерстициалды тіндерді егеуқұйрықтың аналық безінен тыс тініне трансплантациялау арқылы in vivo ALC-ге дифференциациялай алатыны көрсетілді [31]. Сондықтан сүтқоректілердің SLC-тері ер бедеулігінде зерттеу және клиникалық қолдану үшін үлкен уәде берді.

Жақында SLC егеуқұйрықтардан, тышқандардан және адамдардан сәтті оқшауланды, бірақ шошқалардан емес. Алдыңғы зерттеулер Nestin, LIFR, PDGFR[альфа], CD90 және CD51 [11, 32] сияқты егеуқұйрықтардың ұрық интерстицийінде болжамды SLC-де бірнеше ақуыздар анықталғанын көрсетті. Дегенмен, олардың көпшілігі басқа тестикулярлық жасушаларда да экспрессияланды және олар уақыт және/немесе кезеңге тән түрде экспрессияланғандықтан, SLCs пайдалы маркерлерін жасады. Мысалы, Ге және оның әріптестері босанғаннан кейінгі 7 күндік егеуқұйрықтардағы PDGFR[альфа]-оң және 3[бета]-HSD-теріс жасушалар болжамды SLC-тер екенін көрсетті [4]. Содан кейін олар PDGFR[альфа] неонаталдық кезеңдегі егеуқұйрықтардың SLC маркері болып табылады деген қорытындыға келді. Бұл зерттеуде SLC анықталды және PDGFR[альфа] H&E бояуын және иммунохимияны пайдаланып SLC-де экспрессияланатыны көрсетілді. Сонымен қатар, иммунохимия және qRT-PCR талдау нәтижелері PDGFR[альфа] мен Нестиннің екі айлық шошқаға қарағанда босанғаннан кейінгі 7 күндік экспрессиялары айтарлықтай жоғары екенін көрсетті (P < 0,5). Бұл нәтижелер PDGFR[альфа] жаңа туған нәрестелер шошқасының SLC маркері ретінде де пайдаланылуы мүмкін екенін болжады және 7 күндік сынама алу нүктесі шошқалардағы 2 айлық емес, SLC оқшаулау үшін қолайлырақ болды.

Дегенмен, ешбір зерттеулер шошқа SLC оқшаулау туралы хабарлаған жоқ. Егеуқұйрықта SLC алу үшін Percoll тазарту және иммундық таңдау технологиялары Ge et al. (2006) [4] және бірнеше зерттеулер тінтуірдің SLCs алу үшін трансгенді тышқандарды пайдаланды [8, 9]. Ағымдағы зерттеуде коллагеназа және гиалуронидаза қорытуы шошқа аталық бездерінің интерстициальды жасушаларын оқшаулау үшін қолданылды. Сонымен қатар, гиалуронидаза жеке жасушаларды тұқымдық түтіктердің сыртқы бетінен оқшаулай алады. Осылайша, қазіргі зерттеуде қолданылған әдіс тышқандар мен егеуқұйрықтарда қолданылатын әдістерге қарағанда қарапайым және жылдамырақ болды.

Басқа дің жасушалары сияқты, SLCs пролиферациясы мен дифференциациясы да өмірлік маңызды жасуша факторлары мен ақуыздарды қамтамасыз ететін микроортамен реттелді. Аталық бездерде жасушалардың кейбір түрлері, мысалы, Sertoli жасушалары және перитубулярлы миоид жасушалары, SLC қызметін реттеу үшін аталық сұйықтыққа факторларды бөледі [33-35]. Шошқаның SLC культура жүйесі дамымағандықтан, бүкіл аталық бездерден барлық факторлар pTF ретінде алынды. Алдымен, біз pTF қоректік ортаға қосқанда шошқа SLC-терінің дің жасушаларының әлеуетін сақтай алады деп болжадық. Бұл жұмыстың нәтижелері pTF шын мәнінде in vitro 2 апта бойы SLCs дің жасушаларының әлеуетін қолдай алатынын көрсетті. pTF SLCs өзін-өзі жаңарту қасиеттерін сақтай алды, өйткені pTF шығу тегі болжамды SLCs сәйкес болды. Сонымен қатар, pTF құрамында көптеген гормондар, өсу факторлары, цитокиндер және SLC пролиферациясы үшін қажетті материалдық негізді қамтамасыз ете алатын ақуыздардың көп мөлшері бар [22, 36]. PDGFR[альфа] иммунофлуоресценттік талдауы сонымен қатар 2 апта бойы өсірілген жасушалар болжамды SLC екенін көрсетті. Біріктірілген нәтижелер pTF болжамды SLCs өзін-өзі жаңарту қасиеттерін сақтауға үлес қосуы мүмкін екенін көрсетті. Сондықтан, біздің болашақ зерттеулеріміз pTF-де SLC-тің өзін-өзі жаңартуын қолдау үшін маңызды компоненттерді анықтауға бағытталатын болады.

Осы зерттеудің инновациясының екі бағыты болды. Біріншіден, ол шошқа SLCs алудың қарапайым және жылдам әдісін қамтамасыз етті, ол LCs-тегін саралау үшін резервуарды қамтамасыз етуі мүмкін. Екіншіден, ол шошқа SLC үшін жаңа қысқа мерзімді мәдениет жүйесін әзірледі. Сонымен қатар, идеалды адам үлгісі ретінде, стерильді аурулардың кейбір адамның дәрілік заттарының уыттылығын зерттеу, ең алдымен, адам сынақтарына дейін шошқада бағалануы мүмкін, бұл жаңа препараттарды зерттеу шығындарын азайтуы мүмкін.

Қорытындылай келе, біз шошқа SLC-терін бөліп алдық және олардың кейбір негізгі сипаттамаларын анықтадық. Сонымен қатар, pTF мәдениет жүйесіне қосылған кезде шошқа SLC ерекшеліктерін сақтай алады. Бұл жұмыс бізге SLC пролиферациясының және дифференциациясының реттеуші механизмдерін түсінуге көмектесуі мүмкін және шошқа SLC-ге қатысты әрі қарайғы зерттеулерге уәде береді.

Чуаньин Панның ағымдағы мекен-жайы - Солтүстік-Батыс A&F университетінің Жануарлар ғылымы және технологиясы колледжі, № 22 Xinong Road, Yangling, Shaanxi 712100, Қытай.

Авторлар бұл мақаланы жариялауға қатысты бәсекелес мүдделер жоқ деп мәлімдейді.

Бұл жұмысқа Қытайдың Докторантурадан кейінгі ғылым қоры қаржыландырылатын жоба (№ 2014M560809), Орталық университеттерге арналған іргелі зерттеулер қорлары (NWSUAF, № 2452015145) және Қытайдың Ұлттық іргелі зерттеулер бағдарламасы (973 бағдарлама № 2014CB943100) қолдау көрсетті. Профессор Юань-Цян Чжанға (Төртінші әскери медицина университеті, Қытай) ЭСҚ-ны жомарт сыйға тартқаны үшін ерекше алғыс айтамыз.

[1] A. S. Midzak, H. Chen, V. Papadopulos және B. R. Zirkin, "Leydig жасушаларының қартаюы және төмендетілген тестостерон синтезінің механизмдері", Молекулалық және жасушалық эндокринология, том. 299, жоқ. 1, 23-31 б., 2009 ж.

[2] Ю.Янг, З.Су, В.Сю және т.б., «Лейдиг тәрізді жасушаларға бағытталған тышқанның эмбриондық дің жасушалары тестостерон тапшылығы бар еркек егеуқұйрықтарды in vivo құтқарады», бағаналық жасушалар және даму, т. 24, жоқ. 4, 459-470 б., 2015 ж.

[3] Х.Чен, Р.-С. Ge, және B. R. Zirkin, «Лейдиг жасушалары: дің жасушаларынан қартаюға дейін», Молекулалық және жасушалық эндокринология, т. 306, жоқ. 1-2, 9-16 б., 2009 ж.

[4] Р.-С. Ge, Q. Dong, CM Sottas, V Papadopulos, BR Zirkin, and MP Hardy, «Іздеуде егеуқұйрық бағаналы лейдиг жасушалары: идентификация, оқшаулау және тектік ерекше даму», Америка Құрама Штаттарының Ұлттық ғылым академиясының материалдары Америка, т. 103, жоқ. 8, 2719-2724 беттер, 2006 ж.

[5] M. S. Davidoff, R. Middendorff, G. Enikolopov, D. Riethmacher, A. F. Holstein, and D. Muller, "Progenitor жасушаларының тестостерон шығаратын Лейдиг жасушалары анықталды", Journal of Cell Biology, том. 167, жоқ. 5, 935-944 беттер, 2004 ж.

[6] М.С.Дэвидофф, Р.Миддендорф, Д.Мюллер және А.Ф.Голштейн, «Нейроэндокриндік Лейдиг жасушалары және олардың дің жасушалары, перициттер», «Анатомия, эмбриология және жасуша биологиясындағы жетістіктер», т. 205, 1-107 б., 2009 ж.

[7] L. Landreh, K. Spinnler, K. Shubert және т. 99, жоқ. 7, E1227-E1235 беттері, 2014 ж.

[8] M. H. Jiang, B. Cai, Y. Tuo et al., "Нестинпозитивті бағаналы Лейдиг жасушаларының сипаттамасы, тестикулярлық Лейдиг жасушаларының дисфункциясын емдеудің ықтимал көзі ретінде", Cell Research, том. 24, жоқ. 12, 1466-1485 беттер, 2014 ж.

[9] K. C. Lo, Z. Lei, C. Venkateswara Rao, J. Beck және D. J. Lamb, «Лейдиг дің жасушаларын трансплантациялаудан кейін лютеинизациялаушы гормон рецепторларын нокаут тышқандарында де ново тестостерон өндірісі», Эндокринология, том. 145, жоқ. 9, 4011-4015 б., 2004 ж.

[10] E. Stanley, C.-Y. Lin, S. Jin және т.б., «Идентификация, пролиферация және ересек лейдиг дің жасушаларының дифференциациясы», Эндокринология, т. 153, жоқ. 10, 5002-5010 б., 2012 ж.

[11] X. Ли, З. Ванг, З. Цзян және т.б., «Ересектер егеуқұйрықтарының ұрықтарындағы тұқымдық түтікшелермен байланысты дің Лейдиг жасушаларын реттеу», Америка Құрама Штаттарының Ұлттық ғылым академиясының еңбектері, т. 113, жоқ. 10, 2666-2671 б., 2016 ж.

[12] Л.Луо, Х.Чен және Б.Р.Циркин, «Лейдиг жасушаларының қартаюы кезінде тестостерон өндірісі, стероидогендік жедел реттеуші ақуыз (StAR) және P450 бүйірлік тізбекті бөлетін фермент (P450scc) арасындағы уақытша байланыстар», Андрология журналы, том. 26, жоқ. 1, 25-31 б., 2005 ж.

[13] А.В.Печерский, В.Ф.Семиглазов, Г.Б.Лоран, А.И.Карпищенко, В.И.Печерский, және В.И.Мазуров, «Қартайған еркектердің ішінара андроген тапшылығының (ПАДАМ) бірнеше гормондар инкрециясының импульстік режиміне және митоздық белсенділікке әсері», Цитология. , том. 48, жоқ. 10, 862-866 беттер, 2006 ж.

[14] M. Amore, F. Scarlatti, A. L. Quarta, and P. Tagariello, "Жартылай андроген тапшылығы, депрессия және қартайған еркектерде тестостеронды емдеу", Aging Clinical and Experimental Research, том. 21, жоқ. 1, 1-8 беттер, 2009 ж.

[15] А.Печерский, «Қартайған еркектердің ішінара андроген тапшылығын диагностикалау және емдеу ерекшеліктері», Орталық Еуропа Урология журналы, т. 67, жоқ. 4, 397-404 б., 2014 ж.

[16] Y. Nian, M. Ding, S. Hu et al., «Тестостеронды алмастыру терапиясы кеш басталған гипогонадизмі бар науқастардың денсаулығына байланысты өмір сүру сапасын жақсартады: рандомизацияланған бақыланатын сынақтардың мета-талдауы», Andrologia, 2016 .

[17] Ю.Чжан, Р.Ге және М.П.Харди, «Андроген түзетін дің Лейдиг жасушалары: идентификация, функция және емдік потенциал», Ауру маркерлері, том. 24, жоқ. 4-5, 277-286 б., 2008 ж.

[18] S. Bergfelder-Druing, C. Grosse-Brinkhaus, B. Lind және т. 10, жоқ. 3, мақала идентификаторы e0117468, 2015 ж.

[19] З.Цзян және М.Ф.Ротшильд, «Шошқа геномының ғылымы кәмелетке толады», Халықаралық биологиялық ғылымдар журналы, том. 3, жоқ. 3, 129-131 б., 2007 ж.

[20] J. I. Raeside, H. L. Christie, R. L. Renaud және P. A. Sinclair, "Қабан аталықтары: белгілі стероидтарды шығаратын ең әмбебап орган", Көбею және құнарлылықты арттыру қоғамы, том. 62, 85-97 б., 2006 ж.

[21] Ю.Накадзима, Г.Сато, С.Охно және С.Накаджин, «Органотин қосылыстары жаңа туған нәрестелердің шошқа ұрықтарындағы Лейдиг жасушаларында тестостерон өндірісін басады», Journal of Health Science, том. 49, жоқ. 6, 514-519 б., 2003 ж.

[22] П.Ванг, Ю.Чжен, Ю.Ли және т.б., «Тышқанның сперматогониялық дің жасушаларының in vitro пролиферациясына тестикулярлық интерстициальды сұйықтықтың әсері» Зигота, том. 22, жоқ. 3, 395-403 б., 2014 ж.

[23] E.-H. Ли, Дж.-Х. О, Ы.-С. Ли және т.б., «Этан диметансульфонатымен өңделген TM3 лейдиг жасушаларындағы токсикологиялық жолдардың гендік экспрессиялық талдауы», биохимиялық және молекулалық токсикология журналы, том. 26, жоқ. 6, 213-223 б., 2012 ж.

[24] Т.Ли, Дж.Ху, Г.-Х. Ол және т.б., «NDRG2-нің ядролық фактор-каппа В арқылы жоғары реттелуі адамның да, тышқанның бедеулік ұрықтарындағы Лейдиг жасушаларының апоптозы үшін қажет», Biochimica et Biophysica Acta-- Аурудың молекулалық негізі, том. 1822, №. 2, 301-313 б., 2012 ж.

[25] A. J. Morris, M. F. Taylor және I. D. Morris, «in vivo және in vitro емдеуден кейін этан диметансульфонатқа жауап ретінде Лейдиг жасушасының апоптозы», Andrology журналы, том. 18, жоқ. 3, 274-280, 1997 беттер.

[26] B. Heidari, M. Rahmati-Ahmadabadi, MM Akhondi және т.б., «c-kit және PGP9.5 маркерлерін қолдану арқылы ешкі сперматогониялық дің жасушаларын оқшаулау, сәйкестендіру және өсіру,» Көмекші репродукция және генетика журналы, том. . 29, жоқ. 10, 1029-1038 б., 2012 ж.

[27] Дж.-П. Ци, Ю.-Л. Янг, Х.Чжу және т.б., «980 қытайлық сүт безі қатерлі ісігімен ауыратын науқастарда андрогендік рецептордың экспрессиясы және оның молекулярлық субтиптермен байланысы», сүт безі қатерлі ісігі: негізгі және клиникалық зерттеулер, т. 6, 1-8 беттер, 2012 ж.

[28] Y. Zheng, Y. He, J. An et al., "THY1 - шошқа гоноциттерінің беткі белгісі," Көбею, құнарлылық және даму, т. 26, жоқ. 4, 533-539 беттер, 2014 ж.

[29] K. J. Livak және T. D. Schmittgen, "Нақты уақыттағы сандық ПТР және 2(T)(-Delta Delta C) әдісін қолдану арқылы салыстырмалы ген экспрессиясының деректерін талдау," Әдістер, том. 25, жоқ. 4, 402-408 б., 2001 ж.

[30] L. B. Smith және W. H. Walker, «Андрогендер арқылы сперматогенезді реттеу», Жасуша және даму биологиясындағы семинарлар, т. 30, 2-13 б., 2014 ж.

[31] H. Chen, S. Jin, S. Huang және т.б., «Алгинат-инкапсулирленген тұқымдық түтіктер мен интерстициальды тіндерді ересек егеуқұйрықтарға трансплантациялау: in vivo лейдиг дің жасушаларының дифференциациясы?» Молекулярлық және жасушалық эндокринология, том. 436, 250-258 б., 2016 ж.

[32] H. Chen, Y. Wang, R. Ge және B. R. Zirkin, "Leydig жасуша дің жасушалары: идентификация, пролиферация және дифференциация", Молекулалық және жасушалық эндокринология, 2016 ж.

[33] R. M. Sharpe, «Сперматогенезді сперматозоидтар немесе қандағы сертоли жасушалары немесе жыныс жасушалары бөлетін ақуыздарды өлшеуде бақылау», Халықаралық Андрология журналы, том. 15, жоқ. 3, 201-210 б., 1992 ж.

[34] K. J. Turner, C. McKinnell, T. T. McLaren және т. 17, жоқ. 2, 127-136, 1996 беттер.

[35] L. R. Franca, R. A. Hess, J. M. Dufour, M. C. Hofmann және M. D. Griswold, "Сертоли жасушасы: сұлулық пен пластикалық жүз елу жыл", Андрология, т. 4, жоқ. 2, 189-212 б., 2016 ж.

[36] P. G. Stanton, C. F. Foo, A. Rainczuk және т. 16, жоқ. 17, 2391-2402 б., 2016 ж.

Шуай Ю, Пэнфэй Чжан, Вузи Дун, Вэнсиан Цзэн және Чуаньин Пан

Жануарлар ғылымы және технологиясы колледжі, Солтүстік-Батыс A&F университеті, Янлинг, Шэньси 712100, Қытай

Хат-хабарларды Chuanying Pan [email protected] мекенжайына жіберу керек

26 тамыз 2016 ж. қабылданды. 19 желтоқсан 2016 ж. Жарияланды 24 қаңтар 2017 ж.

Академиялық редактор: Джеймс Аджайе

Тақырып: СУРЕТ 1: Шошқа бағаналы Лейдиг жасушаларын (SLC) in situ анықтау. (a) 7 күндік және 2 айлық шошқа аталық бездерінің H&E бояуы (бар = 50 [микро]м). (b) 7 күндік және 2 айлық шошқа аталық бездерінің PDGFR[альфа] иммуногистохимиялық талдауы (бар = 50 [микро]м) қара көрсеткі ұштары тестикулярлық интерстицийдегі PDGFR[альфа]-оң жасушаларды көрсетті. (c) 7 күндік және 2 айлық шошқа ұрықтарындағы Нестиннің мРНҚ экспрессиясы. Әртүрлі әріптер (A, B) айтарлықтай айырмашылықты көрсетеді (P < 0,05).

Тақырып: СУРЕТ 2: Шошқа SLC анықтау. (a) IV типті коллагеназаның көмегімен 7 күндік шошқа ұрықтарынан оқшауланған бастапқы SLCs (бар = 50 [микро] м). (b) бағаналы жасушалар потенциалы мен сперматогенез SLCs қатысатын гендердің RT-ПТР нәтижелері, шошқаның біріншілік оқшауланған SLCs +, оң бақылау (7 күндік шошқа ұрықтары) -, теріс бақылау (стерильді су). (c және d) LIFR және PDGFR[альфа] шошқа аталық бездерінде, шошқа сертоли жасушаларында, шошқа Spermatogonia дің жасушаларында және шошқаның бастапқы оқшауланған SLCs бета-актин Spermatogonia, Spermatogonia дің жасушаларына қатысты қатпарлы өзгеріс ретінде экспрессиялары. Әртүрлі әріптер (A, B) айтарлықтай айырмашылықты көрсетеді (P < 0,05).

Тақырып: 3-СУРЕТ: pTF ортасында өсірілген шошқа SLCs морфологиясының дамуы және PDGFR[альфа] иммунофлуоресценциялық талдауы (бар = 50 [микро]м). (a) pTF ортасында 0 д, 1 в және 2 в өсірілген шошқа SLC морфологиялық дамуы. (b) pTF ортада 2 w үшін өсірілген шошқа SLCs PDGFR[альфа] иммунофлуоресценция.

Тақырып: 4-СУРЕТ: Негізгі ортада өсірілген шошқа SLCs морфологиясының дамуы және CYP17A1 иммунофлуоресценциясы. (а) Негізгі ортада 0 д, 1 в және 2 в өсірілген шошқа SLC морфологиялық дамуы. (b) 2 w үшін негізгі ортада өсірілген шошқа SLCs CYP17A1 иммунофлуоресценциясы.

Тақырып: 5-СУРЕТ: Нестин, LIFR және CYP17A1 шошқа SLC әр түрлі орталарда 2 ват бойы өсірілген. Ескерту: бастапқы жасушалар, бастапқы оқшауланған шошқа SLCs. Әртүрлі әріптер (A, B, C) айтарлықтай айырмашылықты көрсетеді (P < 0,05).

Тақырып: СУРЕТ 6: Негізгі қоректік ортада 7 күн өсіргеннен кейін шошқа LCs май қызыл O бояуы (бар = 50 [микро]м).


Шошқаның тестикулярлық интерстициумынан алынған дің лейдиг жасушаларын анықтау

Сүтқоректілердің аталық бездеріндегі тестикулярлық интерстициалды бөлімшеде орналасқан дің Лейдиг жасушалары (SLCs) тестостеронды синтездейтін Лейдиг жасушаларына (ЛК) дифференциациялауға қабілетті, осылайша тестостерон тапшылығын емдеудің жаңа стратегиясын қамтамасыз етеді. Дегенмен, бұрынғы есептерде шошқадан алынған SLC анықталған және өсірілген жоқ. Ағымдағы зерттеудің мақсаты шошқалардан SLC-терді оқшаулау, анықтау және өсіру болды. Гематоксилинмен және эозинмен бояу және иммунохимиялық талдау SLC бар екенін және PDGFR екенін көрсетті.α негізінен шошқаның тестикулярлық интерстициумында көрсетілді, бұл PDGFR екенін көрсетедіα жаңа туған шошқадағы SLC үшін маркер болды. Сонымен қатар, кері транскрипция-ПТР нәтижелері SLC маркерлерінің бастапқы оқшауланған LC-де экспрессияланғанын көрсетті, бұл олардың болжамды SLC екенін көрсетеді. Болжалды SLC кейіннен торайлардың аталық сұйықтығымен (pTF) ортамен өсірілді. Клондар 7 күннен кейін пайда болды және жасушалар PDGFR экспрессиясын көрсеттіα. Дегенмен, pTF болмаған кезде клондар өспеді, бірақ жасушалар CYP17A1 экспрессиясын көрсетті, бұл pTF шошқа SLC ерекшеліктерін сақтай алатынын көрсетеді. Қорытындылай келе, біз шошқа SLC-ларын бөліп алдық және олардың негізгі сипаттамаларын анықтадық. Бірге алғанда, бұл нәтижелер шошқа SLC клиникалық қолданудағы зерттеулердің негізін салуға көмектесуі мүмкін.

1. Кіріспе

Тестостерон тек сперматогенез процесін сақтап қана қоймайды, сонымен қатар андрогенге тәуелді тіндердің қызметін де қорғайды [1, 2]. Сүтқоректілердің аталық бездеріндегі тестостеронды синтездеудің және секрециялаудың негізгі көзі ретінде ересек Лейдиг жасушалары (ALC) өмірлік қозғалысты қолдауда маңызды рөл атқарады [3]. Жақында ALCs Leydig дің жасушаларынан (SLCs) пайда болатыны көрсетілді [4]. Сүтқоректілердің аталық бездеріндегі ұрық түтікшелеріне жақын интерстициалды бөлімде орналасқан SLC соматикалық дің жасушаларының ең маңызды түрлерінің бірі болып табылады [5, 6].

SLC алғаш рет неонатальды егеуқұйрықтардың ұрықтарынан Ге және т.б. анықтады және байытты.(2006) және одан әрі зерттеулер болжамды тінтуір мен адамның SLC тестостерон шығаратын жасушаларға дифференциациялану қабілетіне ие екенін көрсетті [4, 7, 8]. Осы алдыңғы зерттеулерге сәйкес SLC кейбір сипаттамалары анықталды [4, 9, 10]. Біріншіден, сүтқоректілердің SLC саны өте аз болды, мысалы, 7 күндік егеуқұйрықтардың бір постнатальдық ұрықтан орташа есеппен 8500 болжамды SLC алынды [4]. Екіншіден, егеуқұйрықтардың ұрық түтікшелерінің сыртқы бетінде орналасқан SLCs in situ шпиндель тәрізді болды [4, 10]. Сонымен қатар, болжамды SLC LIF рецепторын (LIFR), тромбоциттерден алынған өсу факторының рецепторларын көрсетеді. α (PDGFRα), Nestin, Thy-1 және кейбір дің жасушаларының маркерлері, алайда олар 3 болдыβ-HSD- және лютеиндеуші гормон рецепторлары- (LHR-) теріс [4, 8, 10, 11]. Өкінішке орай, егеуқұйрықтарды, тышқандарды және адамдарды қоспағанда, басқа сүтқоректі жануарларда SLC зерттеулері жүргізілген жоқ.

Жасы ұлғайған сайын функционалдық LC саны азайып, тестостерон өндіру, cAMP өндіру және стероидогендік ферменттердің белсенділігі төмендейді [12, 13]. Осылайша, ерлер бедеулігі аурулары LCs дисфункциясы немесе тестостеронның бұзылуы нәтижесінде егде жастағы ерлерде пайда болуы мүмкін [14, 15]. Қазіргі уақытта андрогенді алмастыру тестостерон тапшылығын жоюдың ең тиімді терапиясы болды, дегенмен ол жүйелі емдеуді қажет етеді және өзіне тән қауіптерді тудырады [16]. SLCs өзін-өзі жаңарту және LC-ге дифференциациялау мүмкіндігіне ие болды, сондықтан бұл ауруларды SLC трансплантациясы арқылы емдеудің жаңа стратегиясын қамтамасыз етті [17].

Шошқа адам ауруын зерттеуде сүтқоректілердің моделі ретінде шешуші рөл атқарды [18, 19]. Шошқа ұрығы «белгілі стероидтарды шығаратын ең жан-жақты орган» ретінде ұсынылды және адам стероидогенезінің физиологиясы мен генетикасын зерттеу үшін маңызды материал берді [20]. Дегенмен, шошқа SLC әлі оқшауланып, байытылуы керек еді. Сонымен қатар, егеуқұйрықтар мен тышқандар SLC маркерлері мен культура жүйелерін шошқа SLC-ге толығымен салыстыруға қол жеткізілмегендіктен, түрлердің айырмашылығы шошқа SLCs зерттеулерін қиындатты. Клиникалық қолдануда шошқа SLC маңыздылығына байланысты, бұл зерттеудің мақсаты жаңа туған нәрестелер шошқа ұрықтарынан SLC-ларды оқшаулау, анықтау және өсіру болды.

2. Материалдар мен әдістер

2.1. Шошқа аталықтарының жинағы

Зерттеуді Солтүстік-Батыс A&F университетінің Жануарларды күту және пайдалану комитеті Қытай Ұлттық денсаулық институтының зертханалық жануарларды күту және пайдалану жөніндегі нұсқаулыққа сәйкес мақұлдады. Besun agricultural industrial group Co., Ltd. компаниясынан (Янглинг, Шэньси, Қытай) 7 күндік еркек шошқалардың жас аналық бездерінің сынамалары 2% пенициллин-стрептомицин қосылған Дулбекконың фосфатты-буферлі тұзында (DPBS) зертханаға тасымалданды. P/S) ерітіндісі (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) 1 сағат ішінде. 2 айлық еркек шошқалардың аталық үлгілері Қытайдың Шэньси провинциясындағы Янлинг қаласындағы шошқа өсіру фермасынан жиналды.

2.2. Шошқа SLC оқшаулау

Шошқа SLC алу үшін ферментативті ас қорыту әдісі қолданылды. Аталық бездер алдымен жуылды және эпидидимис пен tunica albuginea жойылғаннан кейін ұсақталды. Содан кейін ұрықтың фрагменттері 5% (көлем/көлем) ұрықтың ірі қара сарысуы (FBS, Gibco, UK) және DNase I (100) бар 0,75 мг/мл IV типті коллагеназада (Инвитроген) суспензияланды. μг/мл Bio Basic, Маркхэм, Канада) және инкубацияланған, 34°C температурада 90 минут бойы тұрақты шайқау арқылы [21]. 160 және 59 μСодан кейін жасуша суспензиясын сүзу үшін m моножіпті нейлон торлары (Solarbio, Пекин, Қытай) пайдаланылды [21]. Оқшауланған жасушалар 1 мг/мл гиалуронидазамен (Инвитроген) өңделген және 500 градуста центрифугаланған.

20°C температурада 5 мин. 5 минут тыныштандырылғаннан кейін суспензиялардың үстіңгі жағы баспа құралдарында тағы 15 минут тыныштандырылды. Содан кейін суспензиялардың жоғарғы жағындағы жасушалар жиналды. Соңында, оқшауланған LC Dulbecco модификацияланған бүркіт ортасында өсірілді: қоректік қоспасы F-12 (DMEM/F12, Invitrogen) ортасы.

2.3. Торайлардың аталық сұйықтығын дайындау (pTF)

pTF және бастапқы LC бір көзден алынған. 7 күндік шошқалардың ұрықтары мүмкіндігінше кішкене бөліктерге кесіліп, 20 ° C температурада тіндерді гомогенизациялау арқылы pTF экстракцияланды [22]. Соңында, pTF 0,22 арқылы сүзілді μm дегермге арналған сүзгі.

2.4. Шошқадан оқшауланған LC мәдениеті

Оқшауланған LC тұнбалары екі ортада қайта суспензияланды: бір негізгі орта және басқа pTF ортасы (негізгі орта плюс 30% (көлем/көлем) pTF) [22]. Негізгі орта DMEM/F12, 10% (көлем/көлем) FBS, 1% (көлем/көлем) P/S және 1% (көлем/көлем) витаминдерден тұрды. Содан кейін LC 95% ауа-5% CO атмосферасында инкубацияланды2 34°С температурада және кем дегенде 2 апта бойы өсіреді. Мәдениет ақпарат құралдары күн сайын ауыстырылды.

2.5. Этан диметансульфонатымен (EDS) өңдеу

ЭСҚ-ны профессор Юаньцян Чжан (Төртінші әскери медицина университетінің адам анатомиясы, гистология және эмбриология кафедрасы, Қытай) ұсынған. Алдыңғы әдістерге сәйкес, ЭСҚ диметил сульфоксидте (DMSO)/стерильді суда (1 : 3, к/т) ерітілді [23–25]. Содан кейін бастапқы оқшауланған SLC 6 шұңқырлы пластинаға себілді және культура ерітіндісіне тиісінше 0, 0,5, 0,75 және 1,0 мг/мл EDS (соңғы концентрация) қосылды [24, 25]. Сандық нақты уақыт-ПТР (qRT-PCR) және иммунофлуоресцентті талдаулар ЭСҚ өңдеуден кейін 24 сағаттан кейін жүргізілді.

2.6. Гематоксилин және эозин (H&E) бояуы және иммуногистохимиялық талдау

7 күндік және 2 айлық еркек шошқалардың аталық сынамалары бекітіліп, сусыздандырылды және парафинге салынды. Содан кейін парафин салынған тіндер 5-ке бөлінді μm стандартты процедураларды қолданып, алдын ала қапталған шыны слайдтарға жабыстырылады. Одан кейін гистологияны бақылау үшін парафинмен ендірілген кесінділердің H&E бояуы жүргізілді [26].

Иммуногистохимия үшін, PDGFRα 7 күндік шошқа аталық бездерінің интерстициальды жасушаларында экспрессия және осы ақуыз-оң жасушалардың түрі анықталды. Егжей-тегжейлі парафинді кесінділер парафинсіздендірілді, регидратацияланды және PBS-де шаяды. Содан кейін антигенді алу үлгілерді 0,01 М трис-этилендиамин тетрасірке қышқылы (Трис-ЭДТА рН = 9,0) ерітіндісінде 10 минут қайнатумен байланысты. Секциялар 37°C температурада 2 сағат бойы 10% есек сарысуымен инкубацияланды, содан кейін бастапқы антиденелермен (анти-PDGFR) инкубацияланды.α, 1 : 200, Abcam, Cambridge, UK) түні бойы 4°C температурада және одан кейін 37°C температурада 1 сағат бойы екінші биотинилденген антиденелермен (ZSGB-BIO, Қытай) инкубациялау [27, 28]. Одан кейін ақуыз экспрессиясын анықтау үшін хромоген ретінде 3,3′-диаминобэнзидин (DAB, ComWin Biotech, Қытай) пайдаланылды.

Оқшауланған жасушалардың сипаттамалары иммунофлуоресценциямен бояу арқылы анықталды. Біріншіден, жасушалар 4% параформальдегидпен бекітіліп, 0,05% Triton X-100 арқылы 15 минут бойы өткізіледі. Содан кейін жасушалар түні бойы 4°C температурада бастапқы антиденелермен, содан кейін 2 сағат бойы сәйкес Alexa Fluor 594 конъюгацияланған қайталама антиденелермен (1 : 400, Invitrogen, АҚШ) 37°C температурада инкубацияланды. Соңында, жасушалар 4,6-диамидино-2-фенилиндолмен белгіленді (DAPI, 1: 1000 Beyotime, Қытай). Қолданылған негізгі антиденелер қоянға қарсы PDGFR болдыα (1 : 200, Abcam) және тінтуірге қарсы CYP17A1 (1 : 100, Санта-Круз, АҚШ).

Барлық бояулардың барлық суреттері Nikon Eclipse 80i флуоресцентті микроскоп камерасының (Токио, Жапония) көмегімен түсірілді.

2.7. qRT-ПТР талдауы

Жалпы РНҚ ұсынылған хаттамаға сәйкес RNAiso Plus реагентін (TaKaRa, Далян, Қытай) пайдаланып, жасушалар мен шошқа аталық бездерінің тіндерінен алынды. Содан кейін cDNA кері транскрипциялық ПТР (RT-PCR) үшін PrimeSript™ RT реагент жинағы (TaKaRa) арқылы синтезделді. Оқшауланған жасушаларды сипаттау үшін арнайы праймерлер (1-кесте) пайдаланылды. qRT-ПТР реакция жүйесі 20 болды μL көлемі: 10 μL SYBR® Premix Ex Так II (2x) (TaKaRa), 0,8 μL cDNA, 0,5 μL ПТР алға праймер (10 μмоль/л), 0,5 μL ПТР кері праймер (10 μмоль/л), және 20 жалпы көлемге стерильді су қосылды μL. ПТР реакциясының шарттары келесідей болды: 95°C температурада 3 минут ішінде денатурация, одан кейін 40 цикл (15 секунд бойы 95°C, 30 секунд бойы 60°C және 30 секунд ішінде 72°C).

2.8. Майдың қызыл бояуы

Липид тамшыларын визуализациялау үшін LC 4% формальдегидте (параформальдегидтен жаңадан дайындалған) 15 минут бойы бекітілді, 10 минут бойы Мұнай қызыл O бояу ерітіндісінде (0,3% Oil Red O ерітіндісі) боялады, содан кейін PBS 2 арқылы жуылды.

3 рет. Содан кейін жасушалар Nikon Eclipse 80i флуоресцентті микроскоп камерасының көмегімен түсірілді.

2.9. Статистикалық талдаулар

qRT-ПТР арқылы анықталған мРНҚ өрнектері көмегімен есептелді

әдісі және өрнегі арқылы нормаланадыβ-актин [29]. Әртүрлі үлгілер арасындағы мРНҚ экспрессиясының өзгеруі SPSS (18.0 нұсқасы) (SPSS, Inc., Чикаго, IL, АҚШ) көмегімен есептелді. Әртүрлі топтардағы гендердің статистикалық айырмашылықтары ANOVA әдісімен анықталды және деректер көшірмелердің орташа ± стандартты ауытқуы ретінде ұсынылды.

3. Нәтижелер

3.1. Жаңа туылған нәрестелердің шошқа ұрықтарында SLCs болды

H&E бояуы арқылы босанғаннан кейінгі 7 күндік және 2 айлық шошқа аталық бездеріндегі тестикулярлық интерстицийде бірнеше шпиндель тәрізді жасушалар табылды (1(а) сурет). Сонымен қатар, иммунохимиялық талдаулар PDGFR екенін көрсеттіα негізінен босанғаннан кейінгі 7 күндік шошқалардың аталық интерстицийінде экспрессияланды, ал PDGFR экспрессиясыα 2 айлық шошқа ұрық интерстицийінде төмен болды (1(b)-сурет). Оның үстіне, өрнек Нестин 7 күндік шошқа аталық бездерінде 2 айлық ұрықтарға қарағанда айтарлықтай жоғары болды (

) (1(c)-сурет). Осы нәтижелерге сүйене отырып, біз 2 айлық шошқалардан гөрі 7 күндік шошқалардан SLC жинауды таңдадық.

3.2. Шошқа ұрық интерстициумынан оқшауланған LC-тер SLC-дің экспрессиялық маркерлері

Бастапқы СК қорыту әдісімен алынды (2(а)-сурет). Содан кейін бұл жасушаларды сипаттау үшін RT-ПТР және иммунофлуоресцентті талдау қолданылды. 2(b) суретте көрсетілгендей, RT-ПТР нәтижелері оқшауланған LCs SLC немесе плюрипотентті дің жасушаларының маркерлерін (Нестин, PDGFR) білдіретінін көрсетті.α, GATA-4, Oct4 және LIFR) (2(b)-сурет). Сонымен қатар, Sertoli жасушаларының (SOX9) және сперматогониялық дің жасушаларының (PLZF) маркерлері анықталмады (2(b)-сурет), бұл LC-де бұл жасушалармен ластанбағанын көрсетеді. Нәтижелер бұл ас қорыту әдісінің тұқымдық түтіктерді жоюда пайдалы екенін көрсетті. Сонымен қатар, qRT-ПТР нәтижелері өрнектердің екенін көрсетті LIFR және PDGFRα LC-да шошқа аталық бездеріне қарағанда ( ) айтарлықтай жоғары болды (2(c) және 2(d)-суреттер), бұл әдіс шошқа аталықтарынан алынған SLC-терді байыта алатынын көрсетеді. Қорытындылай келе, SLC маркерлерін білдіретін бастапқы оқшауланған LC (Nestin, PDGFR)α, GATA-4, Oct4 және LIFR) болжамды SLC болды.

EDS егеуқұйрықтар мен тышқандардың аталық бездеріндегі сараланған LC-ларды арнайы жою үшін пайдаланылды [4, 8]. EDS өңдеу нәтижелері бойынша шошқаның дифференциалданған LC пайызы бастапқы оқшауланған СК-да шамамен 23% құрады, ал бастапқы оқшауланған шошқа SLC тазалығы 77% астам болды (суреттер).

, , Қосымша материалда https://doi.org/10.1155/2017/2740272 сайтында қолжетімді). Сонымен қатар, qRT-ПТР нәтижелері Нестин, PDGFRα, CYP17A1 өрнектері және CYP17A1 иммунофлуоресцентті талдауы одан әрі EDS шошқадағы дифференциалданған LC-ларды арнайы жоя алатынын растады (суреттер)

), бұл EDS емдеуден кейінгі жасушалардың өмір сүру көрсеткіштерінің нәтижелеріне сәйкес болды (сурет ).

3.3. Бұл оқшауланған SLC жоғары клоногендік потенциалды көрсетті

Бастапқы SLC оқшауланған болса да, олардың мәдениет жүйесі әлі анықталмады. Ағымдағы зерттеуде ортадағы негізгі компонент ретінде pTF пайдаланылды. Жеті күннен кейін 2 апталық культурадан кейін үлкейген бірнеше клондар түзілді (3(а)-сурет). Иммунофлуоресцентті талдау клондардың PDGFR екенін көрсеттіα оң (3(b)-сурет). Екеуінің де өрнектері Нестин және LIFR pTF ортасымен өсірілген шошқа SLC-де культурасыз SLC-мен салыстырғанда жоғары болды ( ) (5-сурет), бұл pTF SLCs дің жасушаларының әлеуетін сақтай алатынын көрсетеді.

3.4. Оқшауланған SLCs in vitro өсірген кезде LC-ге өздігінен дифференциациялану мүмкіндігін көрсетті

Негізгі ортамен өсірілген оқшауланған жасушалар 2 аптадан кейін клондар түзмеді (4(а)-сурет) және CYP17A1, шошқаның дифференциалданған LC маркері (4(b)-сурет). Оның үстіне екеуінің де өрнектері Нестин және LIFR 2 апта бойы негізгі қоректік ортамен өсірілген шошқа SLC-де культурасыз SLC-мен салыстырғанда айтарлықтай төмен болды ( ) (5-сурет). өрнегі CYP17A1 2 апта бойы негізгі қоректік ортамен өсірілген шошқа SLC-де культурасыз SLC-ге қарағанда айтарлықтай жоғары болды ( ) (5-сурет). Oil Red O бояуы өсірілген жасушалар липидті тамшыларды бөлетінін көрсетті, бұл сонымен қатар дифференциалданған LCs маркері болды (6-сурет). Бұл нәтижелер бастапқы оқшауланған SLC негізгі ортамен өсіргенде LC линияларына дифференциациялай алатынын көрсетті, бұл болжамды SLC-тердің LC-ге өздігінен дифференциациялану мүмкіндігі бар екенін көрсетеді.

4. Талқылау

Аталық бездегі сперматогенез үшін бірнеше жасуша түрлері маңызды болды: жыныс жасушалары, сертоли жасушалары, перитубулярлы миоидтық жасушалар және АЛК [30]. ALCs сүтқоректілерде тестостерон секрециясының негізгі көзі болды, бірақ олар көбеюге қабілетсіз болды. Тестостерон сперматогенезді жанама реттейтіндей сертоли жасушаларына диффузиялай алады. Тестостеронды синтездеу процестері бұзылған кезде постмейоздық сперматидтер айтарлықтай азайған немесе жоқ [30]. Сондықтан SLCs LC дисфункциясы туындаған бедеулікті құтқару үшін өте қолайлы болды. Сонымен қатар, SLCs альгинатпен қапталған интерстициалды тіндерді егеуқұйрықтың аналық безінен тыс тініне трансплантациялау арқылы in vivo ALC-ге дифференциациялай алатыны көрсетілді [31]. Сондықтан сүтқоректілердің SLC-тері ер бедеулігінде зерттеу және клиникалық қолдану үшін үлкен уәде берді.

Жақында SLC егеуқұйрықтардан, тышқандардан және адамдардан сәтті оқшауланды, бірақ шошқалардан емес. Алдыңғы зерттеулер Nestin, LIFR, PDGFR сияқты егеуқұйрықтардың тіндік интерстициумында болжамды SLC-де бірнеше ақуыздар анықталғанын көрсетті.α, CD90 және CD51 [11, 32]. Дегенмен, олардың көпшілігі басқа тестикулярлық жасушаларда да экспрессияланды және олар уақыт және/немесе кезеңге тән түрде экспрессияланғандықтан, SLCs пайдалы маркерлерін жасады. Мысалы, Ge және оның әріптестері PDGFR екенін көрсеттіα- оң және 3β-Постнатальды 7 күндік егеуқұйрықтардағы HSD-теріс жасушалар болжамды SLC болды [4]. Содан кейін олар PDGFR деген қорытындыға келдіα неонатальды кезеңде егеуқұйрықтардың SLC маркері болды. Бұл зерттеуде SLC және PDGFR анықталдыα H&E бояуын және иммунохимияны пайдаланып SLC-де экспрессияланатыны көрсетілді. Сонымен қатар, иммунохимия және qRT-ПТР талдау нәтижелері екеуінің де өрнектері екенін көрсетті PDGFRα және Нестин 2 айлық шошқаға қарағанда босанғаннан кейінгі 7 күндікте айтарлықтай жоғары болды ( ). Бұл нәтижелер PDGFR деп болжадыα Сондай-ақ, неонаталдық шошқа SLC маркері ретінде пайдаланылуы мүмкін және 7 күндік сынама алу нүктесі шошқалардағы 2 айлық SLC-ді оқшаулау үшін қолайлы болды.

Дегенмен, ешбір зерттеулер шошқа SLC оқшаулау туралы хабарлаған жоқ. Егеуқұйрықта SLC алу үшін Percoll тазарту және иммундық таңдау технологиялары Ge et al. (2006) [4] және бірнеше зерттеулер тінтуірдің SLCs алу үшін трансгенді тышқандарды пайдаланды [8, 9]. Ағымдағы зерттеуде коллагеназа және гиалуронидаза қорытуы шошқа аталық бездерінің интерстициальды жасушаларын оқшаулау үшін қолданылды. Сонымен қатар, гиалуронидаза жеке жасушаларды тұқымдық түтіктердің сыртқы бетінен оқшаулай алады. Осылайша, қазіргі зерттеуде қолданылған әдіс тышқандар мен егеуқұйрықтарда қолданылатын әдістерге қарағанда қарапайым және жылдамырақ болды.

Басқа дің жасушалары сияқты, SLCs пролиферациясы мен дифференциациясы да өмірлік маңызды жасуша факторлары мен ақуыздарды қамтамасыз ететін микроортамен реттелді. Аталық бездерде Сертоли жасушалары және перитубулярлы миоид жасушалары сияқты жасушалардың кейбір түрлері SLC қызметін реттеу үшін аталық сұйықтыққа факторларды бөледі [33-35]. Шошқаның SLC культура жүйесі дамымағандықтан, бүкіл аталық бездерден барлық факторлар pTF ретінде алынды. Алдымен, біз pTF қоректік ортаға қосқанда шошқа SLC-терінің дің жасушаларының әлеуетін сақтай алады деп болжадық. Бұл жұмыстың нәтижелері pTF шын мәнінде in vitro 2 апта бойы SLCs дің жасушаларының әлеуетін қолдай алатынын көрсетті. pTF SLCs өзін-өзі жаңарту қасиеттерін сақтай алды, өйткені pTF шығу тегі болжамды SLCs сәйкес болды. Сонымен қатар, pTF құрамында көптеген гормондар, өсу факторлары, цитокиндер және SLC пролиферациясы үшін қажетті материалдық негізді қамтамасыз ете алатын ақуыздардың көп мөлшері бар [22, 36]. PDGFR иммунофлуоресцентті талдауыα сонымен қатар 2 апта бойы өсірілген жасушалар болжамды SLC екенін көрсетті. Біріктірілген нәтижелер pTF болжамды SLCs өзін-өзі жаңарту қасиеттерін сақтауға үлес қосуы мүмкін екенін көрсетті. Сондықтан, біздің болашақ зерттеулеріміз pTF-де SLC-тің өзін-өзі жаңартуын қолдау үшін маңызды компоненттерді анықтауға бағытталатын болады.

Осы зерттеудің инновациясының екі бағыты болды. Біріншіден, ол шошқа SLCs алудың қарапайым және жылдам әдісін қамтамасыз етті, ол LCs-тегін саралау үшін резервуарды қамтамасыз етуі мүмкін. Екіншіден, ол шошқа SLC үшін жаңа қысқа мерзімді мәдениет жүйесін әзірледі. Сонымен қатар, идеалды адам үлгісі ретінде, стерильді аурулардың кейбір адамның дәрілік заттарының уыттылығын зерттеу, ең алдымен, адам сынақтарына дейін шошқада бағалануы мүмкін, бұл жаңа препараттарды зерттеу шығындарын азайтуы мүмкін.

5. Қорытындылар

Қорытындылай келе, біз шошқа SLC-терін бөліп алдық және олардың кейбір негізгі сипаттамаларын анықтадық. Сонымен қатар, pTF мәдениет жүйесіне қосылған кезде шошқа SLC ерекшеліктерін сақтай алады.Бұл жұмыс бізге SLC пролиферациясының және дифференциациясының реттеуші механизмдерін түсінуге көмектесуі мүмкін және шошқа SLC-ге қатысты әрі қарайғы зерттеулерге уәде береді.

Ашу

Чуаньин Панның ағымдағы мекен-жайы - Солтүстік-Батыс A&F университетінің Жануарлар ғылымы және технологиясы колледжі, № 22 Xinong Road, Yangling, Shaanxi 712100, Қытай.

Бәсекелес қызығушылықтар

Авторлар бұл мақаланы жариялауға қатысты бәсекелес мүдделер жоқ деп мәлімдейді.

Алғыс

Бұл жұмысқа Қытайдың Докторантурадан кейінгі ғылым қоры қаржыландырылатын жоба (№ 2014M560809), Орталық университеттерге арналған іргелі зерттеулер қорлары (NWSUAF, № 2452015145) және Қытайдың Ұлттық іргелі зерттеулер бағдарламасы (973 бағдарлама № 2014CB943100) қолдау көрсетті. Профессор Юань-Цян Чжанға (Төртінші әскери медицина университеті, Қытай) ЭСҚ-ны жомарт сыйға тартқаны үшін ерекше алғыс айтамыз.

Қосымша материалдар

Осы зерттеуде оқшауланған бастапқы жасушаларда сараланған LC жою үшін EDS пайдаланылды. S1 суретінде көрсетілгендей, EDS әртүрлі концентрацияларымен (0, 0,5, 0,75 және 1,0 мг/мл) инкубацияланған кезде өлген бастапқы жасушалардың бір бөлігі. Өлі жасушалардың пайызы шамамен 23% болды, бұл сараланған LC пайызы шамамен 23% және бастапқы оқшауланған шошқа SLC тазалығы 77% жоғары екенін көрсетті (S1, S2 сурет). Содан кейін qRT-ПТР нәтижелері өрнектері екенін көрсетті Нестин және CYP17A1 бақылау тобына қарағанда 1,0 мг/мл EDS өңделген топта статистикалық маңызды болды, бұл 1,0 мг/мл осы зерттеудегі ЭСҚ емдеудің ең жақсы концентрациясы болды (S3 сурет). Осы нәтиженің негізінде иммунофлуоресцентті талдау EDS емдеуге дейін және кейінгі бастапқы жасушаларда CYP17A1 экспрессиясын анықтау үшін пайдаланылды. S4-суретте көрсетілгендей, CYP17A1-оң жасушалардың пайызы EDS өңдеуге дейін шамамен 25% болды, бұл өлі жасушалардың пайызына сәйкес болды. Сонымен қатар, EDS өңдеуден кейін CYP17A1-позитивті жасушалардың мембраналық құрылымдары бұзылды, бұл EDS осы зерттеуде шошқа дифференциалданған LCs жоюы мүмкін деп болжайды (S4 сурет).

Анықтамалар

  1. А.С.Мидзак, Х.Чен, В.Пападопулос және Б.Р.Зиркин, «Лейдиг жасушаларының қартаюы және тестостерон синтезінің төмендеуінің механизмдері», Молекулярлық және жасушалық эндокринология, том. 299, жоқ. 1, 23–31 беттер, 2009. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  2. Ю.Янг, З.Су, В.Сю және т.б., «Лейдиг тәрізді жасушаларға бағытталған тышқанның эмбриондық дің жасушалары тестостерон тапшылығы бар еркек егеуқұйрықтарды in vivo құтқарады», Дің жасушалары және дамуы, том. 24, жоқ. 4, 459–470 беттер, 2015. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  3. Х.Чен, Р.-С. Ge және B. R. Zirkin, «Лейдиг жасушалары: дің жасушаларынан қартаюға дейін», Молекулярлық және жасушалық эндокринология, том. 306, жоқ. 1-2, 9–16 беттер, 2009. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  4. Р.-С. Ge, Q. Dong, C. M. Sottas, V. Papadopulos, B. R. Zirkin және M. P. Hardy, «Лейдиг егеуқұйрық жасушаларын іздеуде: идентификация, оқшаулау және тектік ерекше даму», Америка Құрама Штаттарының Ұлттық ғылым академиясының материалдары, том. 103, жоқ. 8, 2719–2724 беттер, 2006. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  5. М.С.Дэвидофф, Р.Миддендорф, Г.Эниколопов, Д.Ритмахер, А.Ф.Голштейн және Д.М'ксфкллер, «Тестостеронды өндіретін Лейдиг жасушаларының прогениторлық жасушалары анықталды», Жасуша биологиясы журналы, том. 167, жоқ. 5, 935–944 беттер, 2004. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  6. M. S. Davidoff, R. Middendorff, D. Müller және A. F. Holstein, «Нейроэндокриндік Лейдиг жасушалары және олардың дің жасушалары, перициттер,» Анатомия, эмбриология және жасуша биологиясындағы жетістіктер, том. 205, 1–107 беттер, 2009. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  7. Л.Ландре, К.Спиннлер, К.Шуберт және т.б., «Адамның ұрық перитубулярлық жасушаларында стероидогендік қабілеті бар болжамды дің лейдиг жасушалары болады,» Клиникалық эндокринология және метаболизм журналы, том. 99, жоқ. 7, E1227–E1235, 2014 бет. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  8. M. H. Jiang, B. Cai, Y. Tuo және т. Жасушаны зерттеу, том. 24, жоқ. 12, 1466–1485 беттер, 2014. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  9. K. C. Lo, Z. Lei, C. Venkateswara Rao, J. Beck және D. J. Lamb, «Лейдиг дің жасушаларын трансплантациялаудан кейін лютеинизациялаушы гормон рецепторларын нокаут тышқандарында тестостерон өндірісі» Эндокринология, том. 145, жоқ. 9, 4011–4015 беттер, 2004. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  10. Э. Стэнли, C.-Y. Лин, С.Джин және т.б., «Ересектер лейдиг дің жасушаларының идентификациясы, көбеюі және дифференциациясы», Эндокринология, том. 153, жоқ. 10, 5002–5010 беттер, 2012. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  11. X. Li, Z. Wang, Z. Jiang және т. Америка Құрама Штаттарының Ұлттық ғылым академиясының материалдары, том. 113, жоқ. 10, 2666–2671 беттер, 2016. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  12. L. Luo, H. Chen және B. R. Zirkin, «Лейдиг жасушаларының қартаюы кезінде тестостерон өндірісі, стероидогендік жедел реттеуші ақуыз (StAR) және P450 бүйірлік тізбекті бөлу ферменті (P450scc) арасындағы уақытша байланыстар», Андрология журналы, том. 26, жоқ. 1, 25–31 беттер, 2005. Қарау: Google Scholar
  13. А.В.Печерский, В.Ф.Семиглазов, Г.Б.Лоран, А.И.Карпищенко, В.И.Печерский және В.И.Мазуров, «Қартайған еркектердің ішінара андроген тапшылығының (PADAM) бірнеше гормондар мен митоздық белсенділіктің импульстік режиміне әсері», Цитология, том. 48, жоқ. 10, 862–866 беттер, 2006. Қарау: Google Scholar
  14. М.Аморе, Ф.Скарлатти, А.Л.Кварта және П.Тагариелло, «Қартайған ерлерде жартылай андроген тапшылығы, депрессия және тестостеронды емдеу» Қартаюдың клиникалық және эксперименттік зерттеулері, том. 21, жоқ. 1, 1–8 беттер, 2009. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  15. Печерский А., «Қартайған ерлердің жартылай андроген тапшылығын диагностикалау және емдеу ерекшеліктері», Орталық Еуропа урология журналы, том. 67, жоқ. 4, 397–404 беттер, 2014. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  16. Ю.Ниан, М.Динг, С.Ху және т.б., «Тестостеронды алмастыру терапиясы кеш басталған гипогонадизмі бар пациенттердің денсаулығына байланысты өмір сүру сапасын жақсартады: рандомизацияланған бақыланатын сынақтардың мета-талдауы,» Андрология, 2016. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  17. Ю.Чжан, Р.Гэ және М.П.Харди, «Андроген түзуші дің Лейдиг жасушалары: идентификация, функция және емдік потенциал», Ауру маркерлері, том. 24, жоқ. 4-5, 277–286 беттер, 2008. Қарау: Publisher сайты | Google ғалымы
  18. С. Бергфельдер-Дрüing, C. Grosse-Brinkhaus, B. Lind және т. PLoS ONE, том. 10, жоқ. 3, мақала идентификаторы e0117468, 2015. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  19. З.Цзян және М.Ф.Ротшильд, «Шошқа геномының ғылымы кәмелетке толады» Биология ғылымдарының халықаралық журналы, том. 3, жоқ. 3, 129–131 беттер, 2007. Қарау: Google Scholar
  20. Дж.И.Ресайд, ХЛ Кристи, Р.Л.Рено және П.А.Синклер, «Қабан ұрығы: белгілі стероидты шығаратын ең жан-жақты орган», Көбею және құнарлылықты арттыру қоғамы, том. 62, 85–97 беттер, 2006. Қарау: Google Scholar
  21. Ю.Накадзима, Г.Сато, С.Охно және С.Накаджин, «Органотиндік қосылыстар жаңа туған нәрестелердің шошқа ұрықтарындағы Лейдиг жасушаларында тестостерон өндірісін басады», Денсаулық туралы ғылым журналы, том. 49, жоқ. 6, 514–519 беттер, 2003. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  22. П. Ван, Ю. Чжэн, Ю. Ли және т.б., «Тышқанның сперматогониялық дің жасушаларының пролиферациясына яичекаралық сұйықтықтың әсері in vitro,” Зигота, том. 22, жоқ. 3, 395–403 беттер, 2014. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  23. Е.-Х. Ли, Дж.-Х. О, Ы.-С. Ли және т.б., «Этан диметансульфонатымен өңделген TM3 лейдиг жасушаларындағы токсикологиялық жолдардың ген экспрессиясын талдау,» Биохимиялық және молекулалық токсикология журналы, том. 26, жоқ. 6, 213–223 беттер, 2012. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  24. Т.Ли, Дж.Ху, Г.-Х. Ол және т.б., «NDRG2-нің ядролық фактор-каппа В арқылы жоғары реттелуі адамның да, тышқанның бедеулік ұрықтарындағы Лейдиг жасушаларының апоптозы үшін қажет», Biochimica et Biophysica Acta—Аурудың молекулалық негізі, том. 1822, №. 2, 301–313 беттер, 2012. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  25. A. J. Morris, M. F. Taylor және I. D. Morris, «in vivo және in vitro емдеуден кейін этан диметансульфонатқа жауап ретінде Лейдиг жасушасының апоптозы», Андрология журналы, том. 18, жоқ. 3, 274–280 беттер, 1997. Қарау: Google Scholar
  26. Б.Хейдари, М.Рахмати-Ахмадабади, М.М.Ахонди және т.б., «c-kit және PGP9.5 маркерлерін қолдану арқылы ешкі сперматогониялық дің жасушаларын оқшаулау, сәйкестендіру және өсіру,» Көмекші репродукция және генетика журналы, том. 29, жоқ. 10, 1029–1038 беттер, 2012. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  27. Ж.-П. Ци, Ю.-Л. Ян, Х.Чжу және т.б., «980 қытайлық сүт безі қатерлі ісігімен ауыратын науқастарда андрогендік рецепторлардың экспрессиясы және оның молекулалық қосалқы түрлерімен байланысы», Сүт безінің қатерлі ісігі: негізгі және клиникалық зерттеулер, том. 6, 1–8 беттер, 2012. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  28. Y. Zheng, Y. He, J. An et al., “THY1 – шошқа гоноциттерінің беткі белгісі,” Көбею, құнарлылық және даму, том. 26, жоқ. 4, 533–539 беттер, 2014. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  29. K. J. Livak және T. D. Schmittgen, «Нақты уақыттағы сандық ПТР және 2(T)(�lta Delta C) әдісін қолдану арқылы салыстырмалы ген экспрессиясының деректерін талдау,” Әдістері, том. 25, жоқ. 4, 402–408 беттер, 2001. Қарау: Google Scholar
  30. Л.Б. Смит және В.Х. Уокер, «Сперматогенезді андрогендермен реттеу», Жасуша және даму биологиясы бойынша семинарлар, том. 30, 2–13 беттер, 2014. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  31. H. Chen, S. Jin, S. Huang және т.б., «Алгинат-инкапсулирленген тұқымдық түтіктер мен интерстициальды тіндерді ересек егеуқұйрықтарға трансплантациялау: in vivo лейдиг дің жасушаларының дифференциациясы?» Молекулярлық және жасушалық эндокринология, том. 436, 250–258 беттер, 2016. Қарау: Publisher сайты | Google ғалымы
  32. Х.Чен, Ю.Ванг, Р.Гэ және Б.Р.Зиркин, «Лейдиг жасушаларының дің жасушалары: идентификация, пролиферация және дифференциация», Молекулярлық және жасушалық эндокринология, 2016. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  33. R. M. Sharpe, «Сперматогенезді адамдық өлшеудегі сперматозоидтардағы немесе қандағы Sertoli жасушалары немесе жыныс жасушалары бөлетін ақуыздарды бақылау», Халықаралық андрология журналы, том. 15, жоқ. 3, 201–210 беттер, 1992. Қарау: Publisher сайты | Google ғалымы
  34. K. J. Turner, C. McKinnell, T. T. McLaren және т. Андрология журналы, том. 17, жоқ. 2, 127–136 беттер, 1996. Қарау: Google Scholar
  35. Л.Р.Фран, Р.А.Гесс, Дж.М.Дюфур, М.К.Хофман және М.Д.Грисвольд, «Сертоли жасушасы: сұлулық пен пластиканың жүз елу жылы», Андрология, том. 4, жоқ. 2, 189–212 беттер, 2016. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы
  36. P. G. Stanton, C. F. Foo, A. Raincuk және т. ПРОТЕОМИКА, том. 16, жоқ. 17, 2391–2402 беттер, 2016. Көру: Publisher сайты | Google ғалымы

Авторлық құқық

Авторлық құқық © 2017 Shuai Yu et al. Бұл Creative Commons Attribution License бойынша таратылатын ашық қол жетімді мақала, ол түпнұсқа жұмыс дұрыс сілтеме жасалған жағдайда кез келген ортада шектеусіз пайдалануға, таратуға және көбейтуге рұқсат береді.


Адам мен шошқадағы Лейдиг жасушасының морфологиялық айырмашылығы неде? - Биология

Аннотация

Біздің зерттеуіміздің мақсаты қуық асты безінің қатерлі ісігіне байланысты екі жақты орхиэктомиядан өткен пациенттердің аталық бездерінен бөлінген жасушалардың in vitro өсуге қабілеттілігін және егер болса, функционалдық белсенді екенін көрсету болды. Адамның өсірілген жасушаларының функционалды күйін көрсету үшін иммунцитохимия жасалды. Лютеиндеуші гормон рецепторларының (LHR), митохондриялардың және цитоскелеттік элементтердің иммунолокализациясы егжей-тегжейлі көрсетілді. Сонымен қатар, культураланған Лейдиг жасушалары арқылы тестостерон секрециясын өлшеу үшін радиоиммунологиялық талдау қолданылды. Номарски интерференциялық контрастын және жұқа иммунофлуоресценция талдауын қолдана отырып, LHR үшін оң иммундық бояу Лейдиг жасушаларының барлығында дерлік байқалды, бірақ ол жеке жасушаларда әртүрлі қарқындылықта болды. Тестостеронды өлшеу hCG-стимуляцияланған және ынталандырылмаған Лейдиг жасушаларының тестостерон секрециясының арасындағы айтарлықтай айырмашылықты анықтады (p<0,05). Сонымен қатар, тестостерон деңгейлері 24 және 48 сағаттық мәдениеттерде 72 сағатқа қарағанда айтарлықтай жоғары болды (p<0,05). Лейдиг жасушаларының культурадағы морфологиялық талдауы мононуклеарлы және көп ядролы жасушалардың болуын анықтады. Соңғы жасушалар hCG-стимулдандырылған және ынталандырылмаған дақылдарда пайда болды. MitoTtracker молекулалық маркерімен таңбаланған Лейдиг жасушаларында жасуша ішіндегі ядролардың санына қарамастан митохондриялардың көптігі және микротүтікшелер мен микрофиламенттердің типтік таралуы байқалды, бұл адамның моно және көп ядролы Лейдиг жасушалары арасында in vitro арасында функционалдық айырмашылықтардың жоқтығын көрсетеді. Көп ядролы жасушалардың пайызы hCG-стимуляцияланған және ынталандырылмаған дақылдарда бірдей болғандықтан (тиісінше 23,70% және 22,80%), бұл жасуша популяциясының пайда болуы гормоналды ынталандырудан тәуелсіз болып көрінеді.

Осы қағазды жаңарту немесе жою сұрауын жіберу үшін Жаңарту/Түзету/Жою сұрауын жіберіңіз.


Andreis PG, Cavallini L, Malendovicz LK, Belloni AS, Rebuffat P, Mazzocchi G, Nussdorfer GG (1989) Адам хорионикалық гонадотропиндерімен ұзақ емдеуге егеуқұйрық Лейдиг жасушаларының морфологиялық және функционалды жауаптары. J Submicroc Cytol Pathol 21:703–711

Берг А (1985) Крипторхидизмнің тестикулярлық макрофагтардың морфологиясына әсері: егеуқұйрық ұрықтарындағы Лейдиг жасушалары-макрофагтардың өзара әрекеттесуінің дәлелі. Int J Androl 8:86–96

Берг А (1987) hCG-мен емдеу бір жақты крипторхидті егеуқұйрықтардағы Лейдиг жасушалары мен тестикулярлық макрофагтардың мөлшерін арттырады. Int J Androl 10:765–772

Кристенсен АК (1975) Лейдиг жасушалары. Physiol Endocrinol 5:57–94 анықтамалығы

Кристенсен А.К., Гиллим С.В. (1969) Жыныс бездеріне баса назар аудара отырып, стероидты секрециялық жасушалардағы жұқа құрылым мен функцияның корреляциясы. Жыныс бездері. McKerns KW (ed) Солтүстік Голландия, Амстердам, 453–459 беттер

Кристенсен А.К., Peacock KC (1980) Адам хорионикалық гонадотропинінің артық мөлшерімен созылмалы түрде емделген ересек егеуқұйрықтардың ұрықтарындағы Лейдиг жасушаларының санының артуы. Biol Reprod 22:383–391

Ewing LL, Zirkin BR, Cochran RC, Kromann N, Peters C, Ruiz-Bravo N (1979) егеуқұйрықтар, қояндар, теңіз шошқалары, иттер және хомяктардың тестостерон секрециясы in vivo перфузия: Лейдиг жасушаларының массасымен корреляция. Эндокринология 105:1135–1142

Ewing LL, Wing T-Y, Cochran RC, Kromann N, Zirkin BR (1983) Лейдиг жасушасының құрылымына және тестостерон секрециясына лютеиндеуші гормонның әсері. Эндокринология 112:1763–1769

Fawcett DW, Neaves WB, Flores MN (1973) Сүтқоректілердің аталық безінің интерстициальды ұлпасының ұйымдастырылуы мен түтікаралық лимфа тамырларына салыстырмалы бақылаулар. Biol Reprod 9:500–532

Fouquet J-P, Meusy-Dessolle N, Dang DC (1984) Маймылдың постнатальді дамуы кезінде Лейдиг жасушаларының морфометриясы мен плазмалық тестостерон арасындағы байланыс, Macaca fascicularis. Reprod Nutr Develop 24:281–296

Hardy MP, Zirkin BR, Ewing LL (1989) Пубертаттық егеуқұйрықтың ұрықтарындағы Лейдиг жасушаларының ересек популяциясының дамуына кинетикалық зерттеулер. Эндокринология 124:762–770

Хатакеяма С (1965) Адам аталық безінің интерстициальды жасушаларын, әсіресе олардың жұқа құрылымдық патологиясын зерттеу. Acta Pathol Jpn 15:155–196

Ичихара I, Pelliniemi LJ (1975) егеуқұйрықтың вентральды простатасының базальды жасушасының және ацинарлы капсуланың ультрақұрылымы. Анат Анз 138:355–364

Ичихара I, Kawai N, Heilbronner R, Rohr H-P (1985) Иттегі простатикалық ацинарлы базальды жасушалардың стереологиялық және жұқа құрылымдық зерттеулері. Cell Tissue Res 242:519–525

Kaler LW, Neaves WB (1978) Адамның жасы ұлғайған сайын Лейдиг жасушасының популяциясының тозуы. Anat Rec 192:513–518

Карновский MJ (1971) Электрондық микроскопияда ферроцианидпен қалпына келтірілген осмий тетроксидін қолдану. J Cell Biol (конспект) 284:146

Keeney DS, Ewing LL (1990) Гипофизэктомияның және сперматогендік функциядағы өзгерістердің ересек егеуқұйрықтардағы Лейдиг жасушаларының көлеміне, санына және пролиферациясына әсері. Дж Андрол 11:367–378

Кормано М (1967) Босанғаннан кейінгі егеуқұйрықтағы аталық қан тамырларын ангиографиялық зерттеу. Z Anat Entwickl Gesch 126:138–153

Кормано М, Суоранта Н (1971) Ересек адамның ұрық безінің микроваскулярлық ұйымы. Anat Rec 170:31–40

Котари Л.К., Гупта AS (1974) Қартаюдың адам ұрық безінің көлеміне, құрылымына және жалпы Лейдиг жасушаларының мазмұнына әсері. Int J Fertil 19:140–146

Kuopio T, Pelliniemi LJ (1989) ультрақұрылымдық иммунотаңбалау арқылы көрсетілген егеуқұйрық Лейдиг жасушаларының патч базальды мембранасы. Cell Tissue Res 256:45–51

Kuopio T, Pelliniemi LJ, Huhtaniemi I (1989) Адам хорионикалық гонадотропинін бір рет енгізгеннен кейін неонатальды егеуқұйрық ұрығында Лейдиг жасушаларының жылдам пролиферациясы және лютеинизациялаушы гормон рецепторларының толықтырылуы. Biol Reprod 40:135–143

Leathem JH, Albrecht ED (1974) Жастың егеуқұйрықтағы аталық дельта-5-3β-гидроксистероид дегидрогеназасына әсері. Proc Soc Exp Biol Med 145:1211–1214

Lin T, Murono E, Osterman J, Allen DO, Nankin HR (1980) Қартаюдағы Лейдиг жасушасы: 1. егеуқұйрықтардағы гонадотропинді ынталандыруға тестостерон және аденозин 3′,5′-монофосфатты жауаптар. Стероидтер 35:653–663

Lunstra DD, Schanbacher BD (1988) Ұзақ мерзімді екі жақты крипторхидті қошқарлардағы аталық без функциясы және Лейдиг жасушасының ультрақұрылымы. Biol Reprod 38:211–220

Maddocks S, Sowerbutts SF, Setchell BP (1987) Адам хорионикалық гонадотропинін қайталап енгізудің тамырлардың өткізгіштігіне, жасушадан тыс сұйықтық көлеміне және егеуқұйрықтардың ұрықтарындағы лимфа ағынына әсері. Int J Androl 10:535–542

Meites J, Simpkins JW, Huang HH (1979) Гипоталамустың биогенді аминдерінің қартаю егеуқұйрықтарындағы гонадотропиндер мен пролактин секрециясына қатынасы. Қартаюдың физиологиясы және жасуша биологиясы, т. 8. Черкин А және т.б. (eds) Raven Press, Нью-Йорк, 87–94 беттер

Mendis-Handagama SMLC, Risbridger GP, Kretser DM de (1987) Жаңа туған нәрестенің және ересек егеуқұйрықтың интерстициумының құрамдас бөліктерінің морфометриялық талдауы. Int J Androl 10:523–534

Mendis-Handagama SMLC, Zirkin BR, Ewing LL (1988) In vitro перфузияланған хомяк, егеуқұйрық және теңіз шошқасының ұрықтарындағы тестостерон секрециясымен аталық интерстициум компоненттерін салыстыру. Am J Anat 181:12–22

Mendis-Handagama SMLC, Zirkin BR, Scallen TJ, Ewing LL (1990) Ересек егеуқұйрық Лейдиг жасушасының пероксисомаларын зерттеу. Дж Андрол 11:270–278

Миллер SC, Bowman BM, Rowland HG (1983) Құрылымы, цитохимиялық эндоцитарлық белсенділігі және егеуқұйрықтардың тіндік интерстициалды макрофагтарының иммуноглобулиндік (Fc) рецепторлары. Am J Anat 168:1–13

Мори Х, Кристенсен АК (1980) Қалыпты егеуқұйрық аталық безіндегі Лейдиг жасушаларының морфометриялық талдауы. J Cell Biol 84:340–354

Мори Х, Шимизу Д, Такеда А, Такиока Ю, Фукуниши Р (1980) Қалыпты гвиней шошқасының ұрықтарындағы Лейдиг жасушасының стереологиялық талдауы. J Electron Microsc 29:8–21

Мори Х, Шимизу Д, Такеда А, Фукуниши Р, Кристенсен АК (1982a) Қалыпты ересек тышқандардағы тестикулярлық Лейдиг жасушасының морфометриялық талдауы. Anat Rec 204:333–339

Мори Х, Хиромото Н, Накахара М, Шираиши Т (1982b) Қарт адамдардағы Лейдиг жасушаларының ультрақұрылымының стереологиялық талдауы. J Clin Endocrinol Metab 55:634–641

Niemi M, Sharpe RM, Brown WRA (1986) егеуқұйрық аталық безінің интерстициалды тініндегі макрофагтар. Cell Tissue Res 243:337–344

Nieschlag E, Loriaux DL (1972) Плазмадағы тестостерон үшін радиоиммундық талдау. Z Klin Biochem 10:164–168

Nussdorfer GG, Robba C, Mazzocchi G, Rebuffat P (1980) Адам хорионикалық гонадотропиндерінің егеуқұйрық аталық безінің интерстициальды жасушаларына әсері: морфометриялық және радиоиммунологиялық зерттеу. Int J Androl 3:319–332

Pirke KM, Geiss M, Sintermann R (1978) Жас ересек және ескі еркек егеуқұйрықтарда тестостерон арқылы LH кері байланысын бақылауға арналған сандық зерттеу. Acta Endocrinol (Копен) 89:789–795

Riegle GD, Miller AE (1978) Қартаюдың егеуқұйрықтардағы гипоталамус-гипофизальды-гонадальды бақылау жүйесіне әсері. II. Аталық репродукция A. Аталық жыныс жүйесінің қартаюы. Schneider EL (ред). Raven Press, Нью-Йорк, 160–165 беттер

Russell L, Burquet S (1977) Лейдиг жасушаларының ультрақұрылымы ферроцианид-осмий қоспасымен қайталама тіндерді өңдеу арқылы анықталған. Тін жасушасы 9:751–766

Sinha AA, Erickson AW, Seal US (1977) Crabeater, leopard and Ross итбалықтарындағы Лейдиг жасушаларының жұқа құрылымы. J Reprod Fertil 49:51–54

Скиннер М.К. (1987) Аталық бездегі жасуша-жасуша әрекеттесуі. Энн NY Acad Sci 513: 158–171

Snedecor GW, Cochran WG (1974) Статистикалық әдістер. Айова штатының университетінің баспасы, Амес

Teerds KJ, Rooij DG, Rommerts FFG, Wensing CJG (1988) EDS енгізу немесе күнделікті HCG емдеуден кейін егеуқұйрық Лейдиг жасушасының прекурсорлық жасушаларының пролиферациясын және дифференциациясын реттеу. Дж Андрол 9:343–351

Weibel ER (1969) Электрондық микроскопиялық цитологиядағы морфометрияның стереологиялық принциптері. Int Rev Cytol 26:235–302

Weibel ER (1979) Стереологиялық әдіс 1. Биологиялық морфометрияның практикалық әдістері. Академиялық баспасөз, Лондон

Weibel ER, Paumgartner D (1978) Гепатоцитарлы мембраналар бойынша біріктірілген стереологиялық және биохимиялық зерттеулер. 11. Көлемдік және беттік тығыздықты бағалауға қалыңдық әсерін түзету. J Cell Biol 77:584–597

Weibel ER, Kistler GS, Scherle WF (1966) Морфометриялық цитологияның практикалық стереологиялық әдістері. J Cell Biol 30:23–38

Zirkin BR, Ewing LL (1987) егеуқұйрық ұрығының жетілуі кезіндегі Лейдиг жасушаларының дифференциациясы: жасуша саны мен ультрақұрылымын стереологиялық зерттеу. Anat Rec 219:157–163

Zirkin BR, Ewing LL, Kromann N, Cochran RC (1980) егеуқұйрықтар, қояндар, теңіз шошқалары, ит және хомяк ұрықтары арқылы тестостерон секрециясы in vitro перфузия: Лейдиг жасушаларының ультрақұрылымымен корреляция. Эндокринология 107:1867–1874


Лейдиг жасушаларының гипоплазиясы

Лейдиг жасушаларының гипоплазиясы (LCH) - ерлердің жыныстық дамуын бұзатын ауру. Бұл еркек жыныс гормондарын (андрогендер) бөлетін аталық бездердің жасушалары болып табылатын Лейдиг жасушаларының толық емес дамуын тудырады. Бұл гормондар еркектердің қалыпты жыныстық дамуы үшін қажет, өйткені ұрпақты болу органдары (туылғанға дейін), сондай-ақ жыныстық жетілу кезінде қалыптасады. LCH бар генетикалық еркекте типтік еркек хромосомалары бар (46, XY), бірақ андроген деңгейінің төмен болуына байланысты жыныстық айырмашылықтар ауқымы болуы мүмкін. [1] [2] [3]

LCH бар генетикалық еркекте сыртқы жыныс мүшелері еркек немесе әйел анық көрінбеуі мүмкін (бір мағыналы жыныс мүшелері). LCH спецификалық ерекшеліктеріне кішкентай пениса (микропенис), жыныс мүшесінің ұшында емес, төменгі жағындағы уретра саңылауы (тесігі) (гипоспадиялар) және екі жартыға бөлінген ұрық қабығы (қос жарғақ) болуы мүмкін. LCH ауыр түрімен ауыратын адамда тек әйелдің сыртқы жыныс мүшелері және кішігірім түспеген аталық бездері болуы мүмкін (жамбаста, іште немесе шапта орналасқан). [1] [3] Ауыр LCH бар еркектерде жыныстық жетілу кезінде денедегі шаштың көбеюі, бетіндегі шаштар және тереңірек дауыс сияқты қайталама жыныстық белгілер пайда болмауы мүмкін. [2]

LCH мутациясынан туындайды LHCGR ген және мұра аутосомды рецессивті. [1] [2] LCH үшін стандартты емдеу жоқ. Емдеу әр адамның ерекшеліктері мен ауырлығына байланысты және түспеген ұрық бездері үшін гормондық терапия хирургиясын, ұрық бездерін алып тастауды немесе жыныстық айырмашылықтарды түзетуді және бедеулікке арналған көмекші репродуктивті технологияны қамтуы мүмкін. [3] [4] Мамандар тобы жиі LCH бар адамды емдеу әдістерін анықтау үшін бірге жұмыс істейді.

Ескерту: Генетикалық әйелдер (46, XX) ерлерде LCH тудыратын мутацияларды мұра ете алады. Бұл мутациялары бар генетикалық әйелдерде әйелдің сыртқы жыныс мүшелері қалыпты және жыныстық жетілу кезінде әйелдің қалыпты дамуы болады, бірақ аменорея (етеккірдің болмауы) және бедеулік болуы мүмкін. [5]



Пікірлер:

  1. Fet

    Бұл мүмкін емес.

  2. Fielding

    And what would we do without your very good phrase

  3. Abdel

    Ол өтірік.

  4. Isam

    Қандай жақсы хабарлама

  5. Nagar

    Симпатикалық хабарлама

  6. Yozshulabar

    Мен де бұл сұраққа алаңдаймын.



Хабарлама жазыңыз